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标准菌株质量控制作业指导书 1、目的： 对微生物标准菌株的验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等进行 规定，确保标准菌株符合要求，保证检测结果。 2 、职责： 2.1 、检测中心主任负责标准菌株资源的配备。 2.2 、微生物检测室工作人员负责标准菌株的有效储存和正确的使用。 3、要求： 3.1 供应商的选择：选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须有 附件的供应商的合格证或检测报告，来证明所采购的标准菌株是合格的。 3.2 标准菌株和验收 菌株一到实验室，一定要记录好菌株号和标准菌株来源，确保溯源性清楚。 同时，还应尽可能多的菌株信息，如：标准菌株名称和数量、生产日期、接收日 期和有无破损等。 3.3 冻干标准菌株的复活： 3.3.1、开启产品包装：先用 70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包 装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株保藏管上。 3.3.2、复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明）进行复活。 冻干菌株的传代次数不得超过 5 代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为 第 F0 代。捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。垂直握住安瓿瓶并轻 拍之，使液体流入含小球的管底。通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭 子浸于水合液体。挤压并旋转拭子，接种于初级培养平板，接种圈的直径约为 25mm ，用一无菌接种环在先前接种区域划线 10-20 次，促使分离出单菌落。同 时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种 3%氯化钠胰蛋白 胨大豆肉汤管。将接种好的平板和管立即进行培养。细菌培养温度通常为 25℃ 或 37℃。多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现 象，需要将正常培养时间加倍。复活后的菌株为 F1 代。 3.3.3 将 TSB 生长的浓菌液吸 0.5mL 于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出， 将保藏管-18℃保存 1-3 年为标准储备菌株 F2 代。将平板上生长的良好菌株接种 于营养琼脂斜面（副溶血性弧菌用 3%氯化钠营养琼脂）36℃培养 24h 当作工作 菌株，为 W3 代，记录为 F2 代。 3.3.4、工作菌株确认方法及依据： 大肠杆菌的确认依照 “SN 0169-1992 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和 大肠杆菌检验方法”执行。 金黄色葡萄球菌的确认依照“SN/T 0172-2010 进出口食品中金黄色葡萄球菌 检验方法”执行。 沙门氏菌的确认依照 “SN 0170-1992 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那 菌）检验方法”执行。 副溶血性弧菌的确认依照 “SN/T 0173-2010 进出口食品中副溶血性弧菌检 验方法”执行。 3.4、工作菌株的储存： 3.4.1、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、储存在2-8 ℃的冰箱内。 3.4.2、副溶血性弧菌在常温条件下保存。 3.4.3、储存期限：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌 为 3 个月。 3.5、标准菌株的转接： 3.5.1 标准菌株的复苏：① 菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。 ② 每次使用和复苏时只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养。 3.5.2 标准储备菌株每转接一次须进行确认。 3.5.3 工作菌株转接的方法： ①、配制营养琼脂培养基（副溶血性弧菌加 3%氯化钠）并分装在试管内， 121℃高压灭菌 15 分钟后摆斜面，冷却后备用。 ②、在无菌条件下，用接种环挑取菌苔至新鲜斜面上作 “之”字形划线接 种，放置在 36℃的培养箱内培养24 小时。 3.6 工作菌株的使用： 3.6.1 内部质量控制：一个月一次阳性对照、培养基每批验收； 3.6.2 外部质量控制：能力验证、实验室比对； 3.7、工作菌株的期间核查： 3.7.1 期间核查的频率：每半年对使用标准菌株进行一次期间核查。 3.7.2 工作菌株期间核查的方法及依据：同工作菌株的确认。 3.7.3 建立标准菌株期间核查记录。 3.8 标准菌株的废弃： 3.8.1 标准菌株如已老化、退化、或变异、污染等，经确认试验不符合的或 该菌种已无使用需要的应及时销毁。 3.8.2 废弃的标准菌株由部门负责人批准，使用人员放入高压