IKKα参与调控UVB刺激作用下p53诱导活化的胞内信号转导机制研究.docxVIP

IKKα参与调控 UVB刺激作用下 p53 诱导活化的胞内信号转导机 制研究 背景紫外线 (Ultraviolet radiation,UV) 是一种典型的的环境损伤因素 ; 根 据波长大小可分为 UVA(320-400nm)、 UVB(280-320nm)和 UVC(200-280nm)三种类 型。其中 UVB是诱导机体发生损伤效应的关键因素。 UVB除了能够诱导 VEGF、TNFα 等一系列炎性因子分泌和诱导表达并介导炎 性损伤效应外 , 还能够通过诱导 p53 活化并介导 DNA损伤效应。我们的前期工作 研究结果已经揭示了 UVB诱导炎性损伤效应发生的分子机制 , 因此本论文着重讨 论 UVB诱导 p53 活化并介导 DNA损伤反应的分子机制。 随着 IKK/NF- κ B信号途径研究的不断深入 , 一些 NF-κB和 I κB非相关的新 IKK 激酶底物分子被相继发现 , 提示负责启动 IKK/NF-k B信号通路诱导活化的关键上游信号分子 IKK 激酶具有诱导 NF-κB 途径活化以外的新功能。 IKKa 作为 IKK 激酶的一个重要的催化亚基 , 它能够通过激活一系列 NF-κ B非相关的信号蛋 白分子并以 NF-κB 非依赖方式参与多种生物学反应。 本课题组长期从事 IKKα不依赖于 IKKβ和 NF-κ B 的新功能机制研究 , 并在 UVB诱导的细胞损伤反应模型中取得了一些研究进展。我们发现 :IKKa 能够不依 赖于 NF-κ B 调控 UVB刺激作用下 VEGF的诱导表达 , 并且介导了炎性损伤效应。 目的探索 IKK 激酶催化亚基 IKKa 参与调控 UVB诱导 p53 活化并介导 DNA损 伤反应的分子机制。 方法采用双荧光素酶报道基因分析系统检测在 UVB诱导细胞 反应中 p53 的转录激活活性 ; 通过 Western Blot 检测 Hacat 和 MEFs细胞中 p53ser15( 人 )/ser18( 鼠) 、ATR、ATM、 CHK1、 LKB1和 PERK蛋白的表达 ; 免疫共 沉淀检测在生理状态下内源 IKKα 与 ATR、 ATM、CHK1、 LKB1、 PERK是否存在相 互作用 , 通过流式细胞术探讨了 p53 与 IKKα 对凋亡反应的敏感性。 结果 1、我们发现 UVB能够通过诱导 Hacat 和 MEFs细胞中 p53 活化而介导 促细胞凋亡效应 , 同时我们确定了 IKKα在 p53 的诱导活化及促细胞凋亡反应中 发挥关键作用。 2、IKKα 能够与经典 DNA损伤信号途径 ATR-ATM/CHK1之间发生 功能联络并介导 p53 的诱导活化反应。 期间 ,IKK α 与 CHK1发生相互结合反应是影响 ATR-ATM/CHK1蛋白复合体形成 的关键因素。 IKKα基因缺失或功能障碍条件下 ,ATR 和 ATM无法结合 CHK1,以上 所有信号分子的诱导活化反应被抑制 , 因此造成 p53 活化反应受抑。 3、IKKα也能够与能量代谢应激因子 LKB1之间发生功能联络并介导 p53 的 诱导活化反应。 IKKα 的存在是影响 LKB1与 p53 形成蛋白复合体的关键因素。 IKKα基因缺失或功能障碍条件下 ,LKB1 无法结合 p53 并导致 p53 活化反应 受抑。 4、UVB能够诱导 Hacat 和 MEFs细胞中 PERK活化 , 并且 IKKα还能够通过 激活 PERK介导 p53 的诱导活化反应。 IKKα也可结合于 PERK/p53蛋白复合体 ; 但 IKKα 的存在并是 PERK与 p53 之 间发生相互结合作用的前提条件。结论 1、揭示了 IKKα/ATR-ATM/CHK1/p53信 号通路在介导 UVB诱导细胞损伤反应中的作用机制 ;2 、 LKB1是实现 UVB刺激作 用下 IKKα 调控 p53 诱导活化的另一关键信号传递分子 ;3 、IKKα可以通过调控 内质网应激反应进而实现诱导 p53 活化的信号转导机制。