甘蓝型油菜耐冷性关联分析与机理研究.pdfVIP

摘 要 低温冷害是油菜生产的主要影响因素之一，导致秋、冬季油菜苗期生长迟缓，产量和品质下 降。尤其是我国长江流域油菜主产区，因茬口矛盾、气候影响常导致油菜播期推迟，秋季冷害和 冬季冻害导致油菜苗期缓慢，生长量不足并容易遭受低温冻害，最终造成油菜产量难以提高，提 高油菜耐冷性已经成为双季稻区早熟油菜、粳稻产区迟播油菜遗传改良关键的制约瓶颈。与油菜 低温冻害不同，油菜耐冷性相关的研究相对较少，其分子机理研究较为匮乏，相关基因的挖掘相 对较少，缺少关键的分子标记。本研究对123 份甘蓝型油菜种质资源进行大田迟播，模拟油菜生 产中遭遇的低温冷害胁迫，测定油菜苗期的低温生物量和低温光合气体交换参数，结合前期已公 布的256,397 个单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphisms, SNP ）标记以及53,889 个基因 表达标记（Gene expression markers, GEM ）进行转录组关联分析，挖掘与油菜低温生物量和低温 光合气体交换参数相关联的遗传位点或基因，并开展功能验证，主要研究结果如下： （1）对 123 份甘蓝型油菜种质资源进行低温生物量相关性状（植株鲜重、地下鲜重和地上 鲜重指标）和低温光合气体交换参数相关性状（净光合速率、气孔导度、细胞间CO2 浓度、蒸腾 速率）测定，结果发现低温条件下植株鲜重、地上叶鲜重和地下根鲜重变异范围分别在 38.00-203.93 g 、34.30-187.83 g 和3.63-16.10 g 之间，低温条件下净光合速率、胞间CO2 浓度、蒸 腾速率和气孔导度变异范围分别为12.87-23.66 μmol CO2 m-2s-1，245.21-383.28 μmol CO2 mol-1， 0.96-3.75 mmol H O m-2s-1 和0.16-2.53 mol H O m-2s-1 之间，表明低温生物量和低温光合气体交换 2 2 参数相关性状在油菜种质资源群体中具有丰富变异，并筛选到 BRAUNER SCHNITTKOHL 、 GRÜNER SCHNITTKOHL 和Zachodni 3 份低温生物量和低温光合效率均较高的甘蓝型油菜种质 资源，为耐迟播油菜的品种选育提供资源。 （2 ）利用前期转录组测序开发的SNPs 标记以及GEMs，对迟播后油菜幼苗低温生物量相关 性状和低温光合气体交换参数相关性状进行转录组关联分析。阈值设定为 P3.90×10-6 （-log P=5.40 ）时，检测出与低温光合气体交换参数相关性状显著关联的SNPs 标记201 个，分 10 别来源于148 个编码序列（Coding sequence, CDS) ，其中有200 个SNPs 标记与低温条件下气孔 导度性状相关，另外1 个SNP 标记与低温条件下蒸腾速率性状相关，没有检测出与低温生物量相 关性状显著关联的SNP 标记；阈值设定为P1.86×10-5 （-log P=4.3 ）时，检测出显著关联的GEMs 10 151 个，其中6 个GEMs 与低温生物量相关性状显著关联，另外145 个GEMs 与低温气体交换参 数相关性状显著关联。通过拟南芥同源基因功能注释的查询，对显著性SNPs 标记和GEMs 进一 步筛选，最终确定28 个候选基因，包含与低温生物量相关性状显著关联的 6 个基因和与低温光 合气体交换参数相关性状显著关联的 22 个基因，涉及到植物光合作用、植物生长以及低温逆境 应答过程。分别选取6 份低温生物量高、低两类极端品种和6 份低温光合效率高、低两类极端品 种进行低温胁迫处理，利用qRT-PCR 技术对这28 个候选基因在油菜中同源基因进行表达水平分 析，发现部分光合候选基因成员在低温光合效率高、低两类极端品种之间的表达水平存在不同程 度的差异。在有或无低温胁迫条件下，Cab026133.1 在3 个光合效率高的品种中的表达水平较高， 另外，Cab011968.1、Cab022014.2 和 Cab007526.2 在光合效率高的品种中表达水平也较高，而 Bo5g017460.1 和Cab008128.1 在光合效率高的品种中表达水平反而较低，表明这些基因可能参与