B、Q烟粉虱化学感受相关基因的鉴定与功能研究.pdfVIP

摘 要 烟粉虱Bemisia tabaci 是一种世界性的重大农业害虫，危害600 种以上寄主植物。我们先前 发现，烟粉虱在面对感染番茄黄化曲叶病毒（TYLCV ）的植株与健康植株时，Q 烟粉虱倾向于选 择感染病毒的植株，而B 烟粉虱没有明显选择偏好。为明确Q 烟粉虱趋向选择带毒番茄植株这 个生态现象背后的分子机制，本研究从烟粉虱化学感受基因家族入手，利用生物信息学、分子生 物学与电生理学的技术手段，揭示B 、Q 烟粉虱寄主选择差异的分子机制。主要研究结论如下： 1. 揭示β-月桂烯是B、Q 烟粉虱寄主选择差异的关键气味物质：选择8 种在感染TYLCV 番茄 植株和健康番茄植株之间有含量差异的气味挥发物质和3 种对照物质开展触角电位实验，发 现5 种物质 （β-月桂烯、α-蒎烯、β-罗勒烯、对伞花烃和α-律草烯）在浓度为10 μg/μL 时能 够强烈激活烟粉虱触角，其中β-月桂烯浓度仅为1 μg/μL 时也能够激活烟粉虱触角。结果说 明烟粉虱触角对植物挥发物β-月桂烯、α-蒎烯、β-罗勒烯、对伞花烃和α-律草烯有功能性感 知（其中对β-月桂烯最为敏感），推测β-月桂烯可能是烟粉虱识别某些寄主的关键物质。 2. 明确烟粉虱OBP8 结合β-月桂烯能力最强：明确B 、Q 烟粉虱OBP 基因的数量皆为8 个， 分为1 个Minus-C OBP、2 个Plus-C OBP 和5 个Classic OBP 。通过荧光竞争结合实验，发 现B 、Q 烟粉虱OBP 蛋白可以结合相同的气味物质且总体结合能力相同。无论B 还是Q 烟 粉虱，其OBP5 蛋白都能够与β-榄香烯和α-蒎烯结合（与α-蒎烯结合能力更强），OBP8 蛋 白与β-月桂烯结合能力最强。 3. 明确Q 烟粉虱OR6 受体蛋白对β-月桂烯有功能性感知：明确B 、Q 烟粉虱OR 基因的数量 皆为7 个，分为1 个Orco 和6 个ORs ；荧光定量结果显示，OR 基因主要在烟粉虱头部表达； OR1 ，OR2 和OR3 在B 、Q 烟粉虱间序列相似度达到99% 以上，OR5 和OR6 在B 、Q 烟粉 虱间序列相似度低于40% ；继而采用非洲爪蟾卵母细胞系统表达OR5 和OR6 并分析其对β- 月桂烯的功能性感知，发现B 、Q 烟粉虱OR5 受体蛋白对所选择的气味均无反应，Q 烟粉虱 OR6 对β-月桂烯有一定的反应，而B 烟粉虱OR6 没有反应；寄主选择实验表明β-月桂烯对 B 、Q 烟粉虱均具有一定的吸引作用，Q 烟粉虱OR6 可增强其对β-月桂烯的反应，进而表现 出更强的倾向性。 4. 明确B、Q 烟粉虱GR 与IR 家族基因序列差异和进化特点：鉴定得到B 、Q 烟粉虱GR 基 因各12 个，IR 基因各 10 个。B 、Q 烟粉虱间GRs 相似度达到90%，IR3 、IR5 和IR9 序列 相似度低于70% 。表达谱结果发现，IR1 、IR3 、GR6 和GR10 在B 、Q 烟粉虱中表达情况有 显著差异，可能与B 、Q 烟粉虱对化学物质识别有关。 5. 阐明Q 型烟粉虱CSP11 基因的功能：研究表明BtabCSP11 在雌性成虫的腹部中高表达。使 用RNA 干扰（RNAi ）BtabCSP11 ，可显著减少雌性产下的卵数，这表明BtabCSP11 在烟粉 虱生殖中具有潜在作用。 关键词：烟粉虱，化学感受基因，寄主选择，BtabQOBP8，BtabQOR6 I Abstract Bemisia tabaci is a major agricultural pest worldwide, harming more than 600 host plants. B. tabaci is a compound species composed of a variety of biotypes or cryptic species. There are significant differences in the host range, poison transmission ability and drug