黄曲霉毒素M1、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的肠毒性和肝毒性研究.pdfVIP

摘 要 目前，霉菌毒素污染谷物食品和奶制品的现象较为普遍，黄曲霉毒素M 1 （AFM1 ）和赭曲霉 毒素A （OTA ）是奶及奶制品中常见的两种霉菌毒素，玉米赤霉烯酮（ZEA ）是玉米及其它谷物 中污染最为严重的霉菌毒素，在奶及奶制品中也存在。当肠道作为抵抗外来有害物质的第一道防 线时，肠道细胞会受到高浓度的霉菌毒素危害，从而造成肠功能损伤。肝脏属于机体的主要免疫、 解毒和消化器官，也会暴露于霉菌毒素，对机体健康产生负面影响。 随着人们生活方式的改变，奶及奶制品和谷物也成为家庭常见的食物，AFM 1、OTA 与ZEA 在人体内的暴露风险不容忽视。因此，本文利用免疫荧光、透射电镜、实时荧光定量PCR 法以及 间接酶联免疫吸附试验分析了AFM1 、OTA 和ZEA 对肠上皮细胞Caco-2/HT29-MTX 紧密连接蛋 白定位和黏蛋白分泌的影响。同时，采用代谢组学方法研究了AFM1 、OTA 及其混合物对小鼠肝 脏和HepG2 细胞代谢的影响。主要结果如下： 一，AFM1 、OTA 和ZEA 处理Caco-2/HT29-MTX 细胞后，会增强肠上皮细胞的通透性。霉 菌毒素处理也会明显改变紧密连接蛋白（TJ 蛋白）的形态，破坏TJ 蛋白的结构。混合霉菌毒素 对黏蛋白MUC5AC 和MUC5B mRNA 表达水平和蛋白分泌有显著的调节作用。AFM1 与OTA、 ZEA 共存时，对肠道屏障功能的影响更为严重。霉菌毒素对肠道完整性的损伤与TJ 蛋白定位的 改变和黏蛋白分泌的减少有关。 二，AFM1 与OTA 混合灌胃组血清中AST 活性、TBIL 和GGT 含量显著高于对照组和单独 霉菌毒素灌胃组。通过苏木精-伊红染色法 (hematoxylin-eosin staining, HE)发现，混合灌胃组的小 鼠肝组织出现肝细胞炎症浸润现象、胞质疏松。观察油红O 染色发现单独及混合AFM1 与OTA 灌胃组的小鼠都表现出肝脂肪变性，混合灌胃组尤其严重。通过代谢组学分析得出，相比于AFM1 或OTA 灌胃组，混合灌胃组小鼠肝脏内代谢物受影响较为显著。AFM1 与OTA 混合灌胃组溶血 磷脂酰胆碱类物质的含量出现显著降低，AFM1 与OTA 混合灌胃组羟基苯乳酸、L- gamma -谷氨 酰-L-亮氨酸、水苏碱、L-gamma-谷氨酰-L-缬氨酸、α-亚麻酸、棕榈酸代谢物含量也显著降低。 三，AFM1 与OTA 混合毒素处理组的HepG2 细胞活性与对照组相比逐渐降低，1 μg/ml 的 AFM1 和 0.05 μg/ml 的 OTA 会显著降低细胞活性。用 1 μg/ml AFM1 和 0.05 μg/ml OTA 处理 HepG2 细胞并进行代谢组学分析，得出AFM1 与OTA 混合处理组对HepG2 细胞内代谢物的影响 较为明显。与对照组相比，AFM1 与 OTA 混合毒素处理组的柠檬酸（Citric acid ）、酮戊二酸 （Oxoglutaric acid ）、L-苹果酸（L-Malic acid ）和丙酮酸（Pyruvic acid ）含量显著下调。 综上所述，本研究得出单独及混合的AFM1 、OTA 和ZEA 会引发肠毒性，同时，单独及混 合的AFM1 和OTA 能够引起肝毒性，并筛选出了差异代谢物。相比于单独的霉菌毒素，混合霉 菌毒素会导致更为严重的肠毒性和肝毒性。 关键词：黄曲霉毒素M 1，赭曲霉毒素A ，玉米赤霉烯酮，肠毒性，肝毒性 I Abstract At present, the mycotoxin pollution of cereal food and dairy products is common. Aflatoxin M1 (AFM1) and ochratoxin A (OTA) are two common mycotoxins in milk and dairy products. Zearalenone (ZEA) is the most serious mycotoxin in corn and other grains, and also exists in milk and dairy products. When the gut acts as the