棉花CMS-D8恢复基因Rf2定位及标记开发.pdfVIP

摘 要 棉花是全世界最重要的纺织工业原料，棉花杂种优势的利用可以提高棉花产量，三系杂交制 种是利用棉花杂种优势理想的工具。三裂棉细胞质雄性不育CMS-D8 实现了三系配套，但尚未用 于实践应用，且恢复基因Rf 至今未成功克隆及功能验证。本研究期望对三裂棉细胞质雄性不育 2 的恢复基因Rf 进行定位并开发紧密连锁的InDel 分子标记。研究结果不仅有助于缩短改良恢复 2 系的周期，促进三裂棉细胞质雄性不育三系用于实践生产杂交制种，也为Rf 的分离奠定了基础。 2 本研究取得的结果主要为： 1. 本研究构建了1623 个单株的BC F ((不育系×恢复系)×保持系)分离群体，育性调查结果 1 1 显示群体内有850 株可育单株、不育773株，其分离比符合 1:1，表明CMS-D8育性恢复由单基 因显性控制。 2. 采用亲本重测序，子代BSA 重测序技术结合高通量SNP 基因分型把Rf 初步定位于D05 2 染色体的54.11Mb-55.99Mb，候选区间大小为1.88Mb。根据候选区间内的InDel 变异开发出16 个多态性InDel 标记，通过对6 个交换单株的分析，对Rf 进行了精细定位，进一步把区间缩小 2 到1.48Mb。选择目标区间内与Rf 基因共分离的InDel 标记可用于恢复系改良过程中追踪Rf 基 2 2 因。 3. 获得了能同时区分恢复基因Rf 和Rf 的InDel1892 标记，变异位点序列分析发现CMS-D8 1 2 恢复系有32bp 插入，哈克尼西棉细胞质雄性不育CMS-D2 恢复系有 182bp 插入。InDel1892 标 记结合本课题前期开发的不育胞质相关的atpA SCAR 标记可用于鉴定三系杂交种，并区分杂交种 包含的恢复基因类型。 4. 采用实时荧光定量PCR 分析了候选区间内的8个PPR家族基因在CMS-D8三系材料间的 表达模式，结果发现Gh_D05G3391在恢复系中的表达量极显著低于不育系和保持系。结合本课 题已有的CMS-D8 三系的RNA-Seq 数据，鉴定到一个编码NB-ARC 结构域抗病蛋白基因 Gh_D05G3374在恢复系中的表达量极显著高于不育系和保持系。 关键词： 棉花，恢复基因Rf ，BSA，SNP，InDel 2 I Abstract Cotton is the worlds most important raw material for the textile industry, the utilization of heterosis in cotton increased the yield of cotton，and CMS systemshybrid seedsproduction is an ideal tool to utilize heterosis. The CMS-D8 has matched maintainer line and restorer line, but CMS-D8 system hasnot been applied in practical, andthe restored geneRf hasnot been successfully cloned and