大草蛉雄虫卵黄原蛋白功能研究.pdfVIP

摘 要 大草蛉（ChrysopaPallens）是蚜虫等多种农林业害虫重要的捕食性天敌昆虫。其分布广、食 量大、繁殖能力强，在控制害虫种群、减少农作物损失方面发挥重要作用。大量扩繁是天敌昆虫 应用的基础与前提，而揭示天敌昆虫的生殖生理则有助于开发调控天敌昆虫繁殖的技术与方法， 促进天敌昆虫规模化生产。大草蛉雄虫非常罕见地含有昆虫雌性生殖蛋白Vg，本文克隆了大草 蛉雄虫 Vg基因部分mRNA 序列，并借助RNAi、石蜡切片、透射电镜与转录组测序等技术探讨 了雄虫Vg基因表达对雄虫生殖腺发育、雄虫转录组，及交配后对雌虫寿命、生殖腺发育、产卵 期、产卵量等繁殖指标的影响，明确了大草蛉雄虫 Vg基因在雄虫与雌虫生殖中的功能，并从雄 虫生殖效应的角度出发，揭示了Vg基因的作用机理。主要分为三个部分： 1. 大草蛉雄虫Vg部分序列的克隆及表达分析 克隆了雄虫Vg基因部分mRNA 序列，并在转录水平上检测了时空表达规律，发现 Vg基因 在雄虫不同发育阶段的表达不具有显著性差异，其在腹部表达量最高，是胸部的2.64 倍，头部的 3.51倍数。此外，在蛋白水平上，整虫和腹部的Vg 均由165kD 的大亚基和46kD 的小亚基组成； 而头部和胸部的Vg 只含有小亚基。 2. 大草蛉雄虫Vg基因功能研究 分别统计干扰后雄虫和经交配后雌虫的生物学繁殖指标，结果如下： （1）对雄虫的直接影响：Vg干扰后，雄虫的寿命显著缩短3.33 天；精巢发育延迟；贮精囊 呈现皱缩畸形状态；精子细胞发育延迟。 （2）对经交配雌虫的间接影响：处理组雌虫与对照组相比，其产卵前期、产卵期和周平均 产卵量（前三周）均没有显著差异，而前三周的单粒卵重显著下降了21.61ug、孵化率下降了5.7% 以及总产卵量减少了49.61 粒，此外，处理组卵质明显下降，呈皱缩态，后期变黑不能孵化。 3.RNAi 后雄虫转录组数据初步分析 对 Vg干扰后雄虫与未干扰的雄虫进行了转录组测序，对转录组数据进行了分析，并筛选了 谷胱甘肽S-转移酶（GSTe1）、细胞色素P450 家族302a1 （CYP302a1）、磷脂酶A2 （PLA2）、 碱性磷酸酶（ALP）4 个目标基因进行了表达验证，为后续研究奠定了基础。 关键词：大草蛉雄虫，卵黄原蛋白，RNAi，转录组，基因功能 I Abstract Thegreenlacewing, ChrysopaPallens,isanimportantnaturalpredator,attackingaphidsandother agricultural and forestry pests. It is famous for broad distribution, wide prey spectrum and excellent reproductiveperformance,andplaysimportantrolesinsuppressing pestpopulationandreducingcrop loss. Mass propagation is a basis of application of natural enemy insects. Whereas an insight into reproductive physiology of natural enemy insects is helpful to develop techniques for regulating the reproductiveprocessandtopromotethecommercialproductionofnaturalenemyinsects.Ourprevious studyrevealedthat C.pallenscontainedthefemale-specificproteinVg.Inthispaper,thepartialmRNA sequence of male Vg gene was cloned, and the effects of male Vg gene expression on male gonad development, male transcriptome and reproductive indexes such as longev