用于光动力_免疫联合抗肿瘤的透明质酸载药纳米胶束研究.pdfVIP

摘要 摘 要 我国恶性肿瘤的发病率和死亡率呈逐年上升趋势，是严重危害人民生命和健 康的重大疾病，而传统的肿瘤治疗手段在防止转移和复发方面效果欠佳。研究表 明，光动力治疗不仅可以通过活性氧自由基消融原发肿瘤，而且能够激活机体的 抗肿瘤免疫应答，招募 T 细胞向肿瘤组织迁移浸润，消除局部残留的肿瘤细胞。 然而，肿瘤中同时存在复杂的免疫抑制微环境，高表达吲哚胺2,3-双加氧酶1 的肿 瘤细胞在耗竭大量色氨酸的同时蓄积犬尿氨酸，从而抑制T 细胞免疫应答。因此， 构建兼具光动力治疗与免疫检查点阻断功能的新型复合药物，进而清除肿瘤，具 有重要的研究意义。 本课题以透明质酸(HA)为骨架，以己二酸二酰肼(ADH)为连接臂通过酰胺键 将光敏剂二氢卟吩(Ce6)接枝到HA 上，构建两亲性光敏共聚物HA-Ce6 。采用超声 乳化法将疏水性吲哚胺2,3-双加氧酶1 的抑制剂NLG919 装载到自组装胶束中，得 到靶向性载药纳米胶束 NLG919@HA-Ce6 。动态光散射表征其水动力直径约 175 nm ，载药率约为 14.7%，在透明质酸酶的作用下Ce6 和NLG919 被逐渐释放；细 胞生物学实验研究表明，纳米胶束能够和肿瘤细胞表面高表达的CD44 受体特异性 结合，靶向性地被4T 1 乳腺细胞内吞并富集于细胞内部。在660 nm 激光激发下， NLG919@HA-Ce6 通过ROS 杀死肿瘤细胞，并引起钙网蛋白CRT 外翻和 ATP 释 放，表明光动力可以诱发免疫原性细胞死亡；同时，检测犬尿氨酸水平证实NLG919 具有抑制IDO 1 催化活性的作用，恢复肿瘤微环境中色氨酸的水平，促进T 细胞增 殖。进一步，构建小鼠4T 1 乳腺癌模型，通过小鼠活体荧光成像和肿瘤体积大小、 病理等观察结果，表明Ce6 和NLG919 在肿瘤部位有效蓄积。光动力-免疫联合治 疗有效提升血清中抗肿瘤相关细胞因子水平，增强机体免疫应答，联合治疗显著 抑制了小鼠原位肿瘤的生长。 本论文的研究表明透明质酸载药纳米胶束NLG919@HA-Ce6 有望为原发乳腺 癌提供有效的光动力免疫联合治疗制剂，提示NLG919 与Ce6 联合应用在抗肿瘤 治疗中的应用潜能。 关键词：光动力治疗，免疫原性细胞死亡，IDO 1 抑制剂，透明质酸，联合治疗 I ABSTRACT ABSTRACT The incidence and mortality of malignant tumors in China are increasing year by year, which seriously endanger the human ’s lives and health. Traditional tumor treatment methods are not effective in preventing metastasis and recurrence. Photodynamic therapy not only can kill tumor cells but also can activate the anti-tumor immune response. However, the immune-supressive microenviroment greatly weakens the effect of immune anti-tumor effiency. Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 overexpressed in cancer cells can deplete the tryptophan and accumulate kynurenine to suppress the T cell immune response. Thus, the nanocomplex with the function of PDT and immune-therapy would provide an