VdMYB14调控刺葡萄果实花色苷的合成.pdfVIP

摘 要 刺葡萄 （Vitis davidii）是原产于我国的主要野生葡萄之一，其果实含有丰富的花色苷等多酚 类化合物，常用于酿酒和制汁，具有广阔的市场前景。花色苷是一类水溶性的类黄酮物质，广泛 分布于植物叶片、果实、花等器官中。葡萄果皮中花色苷的含量和种类差异导致了果实的颜色变 化。MYB 转录因子家族在花色苷合成中发挥重要的调控作用，对其进行研究，可以更加深入了 解花色苷的合成调控机制。课题组前期通过刺葡萄转录组数据分析发现一个与果实花色苷合成相 关的候选MYB 基因，命名为 VdMYB14。为了进一步探究VdMYB14 在刺葡萄果实花色苷合成中 的调控作用，本研究以湖南会同黑果刺葡萄为试材，开展了如下研究：分析6个不同果实发育阶 段果皮中花色苷含量变化及 VdMYB14 基因的表达模式；克隆VdMYB14 基因CDS序列，并利用 预测氨基酸序列进行蛋白理化性质、系统发育分析及亚细胞定位分析，初步预测其功能；将 VdMYB14 基因在烟草中进行异源表达，验证其在花色苷合成中的调控作用。主要研究结果如下： 1. 果实转色期 （花后80d）之前，果皮中只有少量花色苷积累，转色以后花色苷开始大量积 累，至成熟期 （花后120d）果皮中花色苷含量为2.34mg/gFW。而 VdMYB14 基因在果实转色期 之前表达量较高，从果实转色期至成熟期，基因表达量持续下降。在果实发育过程中，VdMYB14 基因的表达模式与果皮中花色苷积累的趋势相反，推测 VdMYB14 可能在葡萄果实发育早期抑制 花色苷的积累。 2. VdMYB14 基因的CDS 区全长804bp，共编码267个氨基酸，在第3-153个氨基酸区域具 有R2和R3两个MYB特征结构域。该基因编码的蛋白质相对分子量为29958.61Da，等电点6.51。 利用烟草瞬时表达定位VdMYB14 蛋白在细胞中的位置，发现VdMYB14 融合蛋白的荧光信号主 要分布在细胞核中，表明其主要在细胞核中发挥转录调控作用。系统发育分析表明，VdMYB14 蛋白被聚类在负调控类MYB 转录因子分支中，并且与苹果MdMYB111 的同源性较高，推测其 具有负调控花色苷合成的作用。 3. 异源表达 VdMYB14 基因后，转基因烟草花冠中花色苷含量显著低于野生型，但原花青素 含量高于野生型。VdMYB14 基因能够下调花色苷合成途径中UFGT基因的表达量，上调原花色 素途径中LAR 和ANR 基因的表达量，导致类黄酮途径的中间产物由花色苷途径向原花青素途径 通量转移，从而使转基因烟草花中花色苷合成受到抑制，影响花冠正常着色。结果表明VdMYB14 能够有效抑制花色苷的合成，具体调控机制仍需开展进一步研究进行阐释。 关键词：刺葡萄，花色苷，VdMYB14 转录因子，功能验证 I Abstract Vitis davidii is one of the main wild grapes originated in China, and its berry contains rich anthocyaninsand otherpolyphenols. V.davidii iscommonly used in winemaking andjuicemaking, and has broad market prospects. Anthocyanins are a class of water-soluble flavonoids, which widely distribute in plant leaves, fruits, flowers and other organs. The content and compound variations of anthocyanin in grape skins resulte in the color change of the berries. The MYB transcription factor family play important regulatory roles in anthocyanin synthesis. The study of MYB transcription can further understand the regulation mechanism of anthoc