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流式细胞术 概念 流式细胞术（Flow Cytometry，FCM） 利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单 细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特 定群体加以分选的现代细胞分析技术。 流式细胞仪（Flow Cytometer) 集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算 机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的 一种新型高科技仪器。 流式细胞仪特点 单细胞悬液或生物颗粒 分析速度高 多参数 精度高 当代最先进的细胞定量分析技术 FACSCalibur 特点： 光路调节系统固定 自动化程度高 操作简便 使用寿命长 配备1-2根激光 细胞分选速度慢， 主要用于细胞分析 临床型（台式机） FACSAria 科研型 特点： 分辨率高 选配多种波长和类型激光器 可把感兴趣细胞分选到特定培养孔或板上（4路和24孔板） 适用于高速分选和多色分析 流式细胞仪的工作原理 光学系统 激光光源 光收集系统 液流系统 流动室 液流驱动系统 电子系统 光电转换 数据处理系统 细胞分选系统 信号检测—散射光信号 FSC：反应细胞的相对大小和截面积的大小 SSC 代表细胞的颗粒度和精细结构的变化 全血细胞流式FSC-SSC图 分为前向角散射（FSC)和侧向角散射（SSC)。 激发光源与荧光标记物 激发光波长（nm） 发射光峰值（nm） FITC 488 525（绿） PE 488 575（橙红） PI 488 630（橙红） ECD 488 610（红） CY5 488 675（深红） PreCP 488 675（深红） 细胞术的应用： 流式◆ 细胞膜：流动性、膜电位、膜通透性。◆ 细胞内离子浓度：H+、Na+、K+和Ca2+。◆ 细胞周期：全周期分析、S期分析、M期分析。◆ 细胞表面蛋白质分析：免疫细胞分型、其它表面蛋白分析。◆ 细胞功能：如凋亡、抗药性。◆ 基因表达：内源及外源基因表达。◆ 细胞分选：◆ 细胞克隆 临床应用 白血病免疫分型 HLA-B27: 强直性脊柱炎 淋巴细胞亚群 造血干细胞计数：造血干细胞移植 网织红细胞 PNH诊断（CD55、CD59） 血小板活化试验 人外周血淋巴细胞亚群检测 T淋巴细胞 T淋巴细胞检测 淋巴细胞 CD4+T（Th)淋巴细胞检测 淋巴细胞 CD4+ CD8+Ts淋巴细胞检测 淋巴细胞 CD8+ B淋巴细胞检测 淋巴细胞 B淋巴细胞 细胞内细胞因子染色 1.56 0.25 8.23 0.26 左图显示在抗原刺激前，CD4+和CD4-细胞中能产生IFN-γ的细胞占PBMC的0.25%和1.56% 右图显示在抗原刺激后，CD4-细胞中能产生IFN-γ的增加到8.23%，提示该抗原能促进CD4-细胞分泌IFN-γ Thank you !