实验四微生物平板菌落计数法.pdfVIP

。 实验四 微生物平板菌落计数法 一、实验目的 学习并掌握平板菌落计数的基本原理和方法。 二、实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞， 取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的 菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样 接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞， 所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的 2～3 或更多个细胞。因此平板菌落计数的结 果往往偏低，为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（ cfu ） 而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受 多种因素的影响，但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生 物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程 度的检测。 三、实验器材 1 ． 菌种：酵母菌。 2 ． 培养基： YEB培养基。 3 ． 仪器或其他用具： 1ml 无菌吸管，无菌平皿，盛有 4.5ml 无菌水的试管，试管架， 恒温培养箱等。 四、实验步骤 1 ． 编号 -4 -5 -6 取无菌平皿 9 套，分别用记号笔标明 10 、 10 、 10 （稀释度）各 2 套，另 -1 -2 -3 -4 -5 取 6 支盛有 4.5ml 无菌水的试管，依次标是 10 、 10 、 10 、 10 、 10 、 -6 10 。 2 ． 稀释 用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 已充分混匀的大肠杆菌菌悬液（待测样品），精确地放 -1 0.5ml 至 10 的试管中，此即为 10 倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。 精选资料，欢迎下载 。 将 10 -1 试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。另取一支 1ml 吸管插入 10 -1 试 管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸 管伸入管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。用此吸 -1 -2 管吸取 10 菌液 1ml ，精确地放 0.5ml 至 10 试管中，此即为 100 倍稀 释。······其余依次类推。 放菌液时吸管不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释 不精确，结果误差较大。 -4 -5 -6 3 ． 倒平板法： 1）取样。用三支 1ml 无菌吸管分别吸取 10 、 10 和 10 的稀释菌 悬液各 1ml ，对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放 0.2ml 。 不要用 1ml 吸管每 次只靠吸管尖部吸 0.2ml 稀释菌液放入平皿中，这样容易加大同一稀释度几个重复平板间 的操作误差。 2 ） 倒平板。尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至 45 ℃左右的 LB 培养基约 15 毫升 / 平皿，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混 合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。