发酵过程控制技术 03-02酵母细胞的计数 子情境-活性干酵母发酵条件控制-酵母细胞计数.pptVIP

发酵过程控制技术 03-02酵母细胞的计数 子情境-活性干酵母发酵条件控制-酵母细胞计数.ppt

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子情境:活性干酵母发酵条件控制 -酵母细胞计数 酵母细胞计数 微生物计数是指:测定各类样品中微生物的数量。 土壤、食品、微生物制品(菌肥、农药等) B C A 稀释平板计数法 显微镜直接计数法 比 浊 法 微生物测数方法 D 滤膜培养法 酵母细胞计数 显微直接计数法 采用细菌计数板或血球计数板,在显微镜下对微生物数量进行 直接计数(计算一定容积里样品中微生物的数量)。 优点:快速 缺点: 不能区分死菌与活菌; 只适用于单细胞状态的微生物或丝状微生物的孢子 不适于对运动细菌的计数; 需要相对高的细菌浓度(106/mL以上); 个体小的细菌在显微镜下难以观察; 酵母细胞计数 酵母细胞计数 血球计数板 酵母细胞计数 比浊法 在一定波长下,测定菌悬液的光密 度,以光密度(optical density, 即O.D.) 表示菌量。 实验测量时应控制在菌浓度与光密度 成正比的线性范围内,否则不准确。 酵母细胞计数 膜过滤培养法 当样品中菌数很低时,可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等 样品通过膜过滤器,然后将将膜转到相应的培养基上进行培养,对 形成的菌落进行统计。 稀释平板计数法 又叫平板菌落计数法。 将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单 个细胞,取一定量稀释样液接种到平板上。经过培养,由每个 单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表 原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和接种 量即可换算出样品中的含菌数。 优点:能够获得活菌的信息;对环境微生物分离纯化。 缺点:受多种因素限制,计数的结果比实际含菌量偏低。 通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况 或样品中所含微生物个体的数量(细菌、孢子、酵母菌)。 因此,在此情境中,酵母的计数我们选择平板菌落计数法 1.编号 (培养皿 无菌水) 3.接种 (倾注法、涂板法) 4.倒培养基,制备混菌平板 2.制备 样品稀 释液 5.培养 (培养箱倒置培养) 6.数菌落、计算 平板菌落计数法操作流程 编号(按照稀释倍数进行编号,例如10-1、 10-2) 制备样品稀释液 接种液稀释浓度: 细菌:10﹣4、10﹣5、10﹣6 放线菌:10﹣3、10﹣4、10-5 真 菌:10-2、10-3、10-4 接种(倾注法、涂布法) 稀释涂布法: 优点:可以计数,可以观察 菌落特征。 缺点:吸收量较少,较麻 烦,平板不干燥效果 不好,容易蔓延。 倾注法: 优点:可以计数,吸收量为 1ml,较方便。 缺点:不能观察菌落特征。 培养、数菌落数、计算 计数 培养后取出培养平板,计数平板上的菌落数,计算同一稀释度几个平板上的菌落平均数。 计算 含菌量(CFU)/g(ml) =(计数皿平均菌落数×计数皿稀 释倍数)÷接种量 人工计数 就是在平板底部用水笔划分出小格,在明亮的台式灯下,一格一格数,不容易乱。如果菌落又多又密且分布均匀,可以先在平板底部的正中划一“十字”,十字贯穿整个平板,然后在“十字”基础上平分成若干扇形,数其中一部分后乘以扇形个数。 选择菌落数适宜的平板 × √ 计数 人工计数 半自动计数仪 全自动计数仪 计算菌落总数方法例举(细菌) 注:计数皿选择平均菌落数范围为:细菌、放线菌30—300个/皿、真菌10—100个/皿。含菌量( CFU)结果采取4舍五入、保留2为有效数字。 计数皿的选择方法 1.只有一个稀释度的平均菌落数符合范围: 选择该稀释度计算含菌数。 2.两个稀释度的菌落数符合范围: 高稀释倍数菌落数×稀释倍数 低稀释倍数菌落数×稀释倍数 比值2 ,取两个稀释度计算CFU的均值;比值2,取稀释倍数较低的菌落平均数计算CFU。 3.所有的稀释度平均菌落数300或100: 按稀释倍数最高的平均菌落数计算。 4. 所有的稀释度平均菌落数10或30: 按稀释倍数最低的平均菌落数计算。

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