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DB43/T—2014 ICS DB43 湖南省地方标准 DB43/T—2020 香芋茎尖脱毒技术规程 Technical regulations for detoxification of Taro stem tip （征求意见稿） 2020- - 发布 2020- - 实施 湖南省质量技术监督局???发布 DB43/T—2020 DB43/T—2020 PAGE II PAGE II PAGE PAGE I 目??次 TOC \h \z \t前言、引言标题,1,参考文献、索引标题,1,章标题,1,参考文献,1,附录标识,1,一级条标题, 3 TOC \o 1-1 \h \z \u 前言 1 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 基本要求 1 5 香芋材料的选择与处理 1 6 MS培养基的配制 2 7 茎尖接种 2 8 香芋茎尖的初代培养 3 9 茎尖苗的增殖培养 3 10 培养室环境调控 3 11 病毒检测 4 附录A（规范性附录）病毒病检测引物序列表 5 附录B（规范性附录）MS培养基母液的配制表 6 PAGE 4 II II 前??言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖南省农业农村厅提出。 本标准由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：湖南省蔬菜研究所。 本标准主要起草人：李倩、杨建国、汪端华、吴双花。 PAGE 3 香芋茎尖脱毒技术规程 1 范围 本标准规定了香芋茎尖脱毒的术语和定义、实验室条件及实验人员要求、香芋材料选择与处理、培养基配制、茎尖接种、初代和继代培养、培养环境条件设定、病毒检测的基本要求。 本标准适用于香芋茎尖脱毒技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T 1538.1-2005 培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 SN/T 2964-2011 植物病毒检测规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1茎尖脱毒 Stem tip detoxification 利用病毒在植物体内分布的不均匀性的特点，通过种子、根尖和茎尖生长点附近的分生组织病毒浓度低，大部分细胞不带病毒，取顶端生长点培养获得无病毒植株。 4基本要求 4.1 实验室条件 具备香芋茎尖脱毒、组织培养、病毒检测所需的实验场所、仪器设备和实验条件。 4.2 实验人员要求 实验人员应具备香芋茎尖脱毒、组织培养及分子检测技术操作的能力。 5 香芋材料的选择与处理 5.1 香芋材料的选择 6-10月，在香芋营养生长和生殖生长期，从大田选取健壮的香芋匍匐茎或香芋侧芽用于香芋茎尖脱毒。 5.2香芋材料的处理 将取得的香芋材料种于细沙或珍珠岩中，用800倍多菌灵处理7-10 d。 6 培养基的配制 6.1 MS培养基的配制 6.1.1 母液的配制 直接用合成MS培养基或按照附件1的成分表配制MS大量元素母液、微量元素母液、有机母液、铁盐母液。 6.1.2 MS培养基配制方法 先在烧杯中放入适量蒸馏水，加入琼脂粉6-7 g搅拌均匀，置于电炉上加热；依次加入上述母液或MS培养基，其中大量元素20 mL，其他各5 mL，蔗糖30 g；边加热边搅拌至完全溶解；加蒸馏水定容至1 L；用1 mol/L的盐酸或1 mol/L的氢氧化钠调节pH至5.7-5.9；根据不同需要定量分装，盖好瓶盖；分装好的培养基置于灭菌锅内120℃高压灭菌20 min；放置5-7 d，检验培养基灭菌效果。培养基贮存时间不超过一个月。 6.2 初代培养基的配制 在MS培养基的基础上，加入激素NAA 0.15 mg/L、6-BA 4.0 mg/L和山农1号1 mL/L，其操作同6.1.2。 6.3增殖培养基的配制 在MS培养基的基础上，加入激素NAA 0.4 mg/L、6-BA 4.0 mg/L和山农1号1 mL/L，其操作同6.1.2。 7. 茎尖接种 7.1 接种前准备 7.1.1 在接种前准备酒精灯、75%酒精、次氯酸钠、无菌滤纸或接种盘以及接种器械、培养基、体式显微镜、外植体等。 7.1.2 提前30 min打开超净工作台紫外，紫外灭菌完后，打开风机和照明。 7.1.3 接种人员在准备室消毒后在更衣室更换拖鞋、穿白大褂、戴上帽、口罩后方能进入接种室。 7.1.4 操作人员用75%酒精喷或擦手，在操