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沙眼衣原体实验诊断技术进展 1907年，捷克学者 Halberstaeder 和 Prowazek发现沙眼包涵体，1956年我国学 者汤飞凡等分离沙眼衣原体成功，引起了全 世界对其进行广泛深入的研究:1］。沙眼衣 原体(chlamydia trachomatis, Ct) 与人类 疾病关系密切，且目前已成为许多国家和地 区常见的性传播疾病病原体， 日益引起人们 重视。Ct感染的诊断决定于病原学检查。随 着检测技术的进展，Ct感染的诊断也不断地 发生变化。我们就此领域的研究进展作一简 述。 一、细胞生物学检测方法 1.涂片镜检：Ct寄生于柱状上皮细胞内 形成包涵体，取宫颈或尿道标本涂片后，通 过碘染色或姬姆萨染色等可见细胞内包涵 体。但由于泌尿生殖道中完整细胞较少，以 及细胞内包涵体脆性较大， 从而造成敏感性 过低，不推荐用于临床标本的检查，仅限于 Ct的鉴定:2］。 2.细胞分离培养法：由于 Ct的专性细 胞寄生性，一般培养法不能使其生长，只有 在活的细胞内才能增殖、复制。组织细胞培 养法分离 Ct多采用 McCoyi田胞或Hela-229 细胞，染色后在显微镜下观察细胞内有无包 涵体。早期曾试图用尿标本做培养，但阳性 率甚低:3],只能采用尿道或宫颈拭子。培 养法的特异性为100%但敏感性一般低于 100%且各个实验室操作步骤有所不同，没 有标准化，这可能有助于解释对同一种非培 养方法的不同评价。组织细胞培养法是诊断 Ct感染的“金标准” [4],但是由于分离培 养操作复杂，技术及设备要求高，所需时间 长，且敏感性受标本采集、运送、保存等的 影响较大:5],加上国内很多医院不具备细 胞培养条件，因而不适于临床应用，多用于 科研和疑难病例的终鉴定。 二、免疫学检测方法 1.直接荧光抗体测定：将针对 Ct的单 克隆抗体用荧光标记，与标本中的 Ct结合 后，荧光显微镜检查就能见到发荧光的原体。 针对脂多糖的抗体荧光不够亮， 且染色不匀; 而针对主要外膜蛋白的抗体荧光更亮， 且减 少非特异染色:6］。DFA不象培养法必须存 在有活力的Ct,但其敏感性受人群感染率的 影响，且有判定结果带有主观性，荧光易淬 灭，不适于检测大量标本等缺点。多数学者 报道其特异性较高，Hallsworth等［7］报 道可达100%因此在科研中常被用作确证试 验。由于此法操作简便、费用低廉，在不具 备分子生物学试验条件的医院， 可用以检测 临床标本［8］,但也需经验丰富者操作。 2.酶免疫测定：用酶标记的单克隆或多 克隆抗体检测 Ct的LPS或MOMP酶反应生 成有色产物，用酶标仪进行测定。目前有 Chlamydiazyme、ID-EIA、Pharmacia Chlamydia EIA等多种市售诊断试剂盒可供 使用。其敏感性从64%J 98%特异性从93% 到98% ［9 ］。通常认为，其敏感性在高危人 群中可得到满意结果，而在新近感染及治疗 监测中敏感性明显下降。 EIA的优点在于方 法简便、操作自动化，适于短时内大批量标 本的检测。但其最大缺点在于，与其他常见 微生物产生交叉反应，如金黄色葡萄球菌、 A群及B群链球菌、淋病奈瑟菌、醋酸钙不 动杆菌、肺炎克雷伯菌及其他革兰阴性细菌， 从而使特异性达不到100%国外此法多用于 高危人群的筛查，国内应用较少。 三、分子生物学检测方法 直接检测核酸的技术：此技术利用核 酸分子的复性原理，用特定的标记探针去检 测标本中的靶核酸。最初为放射性标记，后 来逐渐发展为酶或化学发光试剂标记。 目前 有美国圣地亚哥Gen-Probe公司生产的发光 标记基因探针试剂盒 PACE-2与培养法相比, Gen-Probe方法的敏感性和特异性分别为 73吩96嘛口 98吟99%[ 9],尚无培养法敏感 和特异。由于此法成本高、步骤繁琐，随着 核酸扩增技术的出现，基因探针技术也就失 去了其应用价值。 核酸扩增技术：继基因探针技术之后， 很快出现了核酸扩增技术，这些技术包括靶 DN械 RNA勺扩增，如聚合酶链反应（PCR）, 基于转录的扩增（TBA）,自动维持序列扩增 （3SR）以及链置换扩增（SDA）;探针扩增， 如连接酶链反应（LCR） ,Q-6复制酶的扩增； 杂交后信号的扩增，如复合探针和分支DNA 探针。其中研究和使用较多的是 PCF^l LCR 尤其是PC璇术，有学者认为其将对感染诊 断引起革命性变化:10］。 PCRW于一种核酸体外扩增技术，用寡 核昔酸指导的DNA^成的重复循环来实现对 靶核酸序列的扩增。PC嗨个循环包含变性、 退火、延伸3个步骤，在不到2小时内，经 过30个循环，在理论上可将最初的靶 DNA 扩增109倍。最后可用凝胶电泳或探针杂交 检测扩增的DNA由于先将标本中的核酸特 异成分先行扩增复制再行检出，其敏