注射剂灭菌工艺[分析].pptVIP

注射剂生产常见问题问答 6、请问灭菌前微生物污染水平和耐热性（D值）的测试方法？ 答：微生物污染水平通常采用滤膜过滤法截留微生物，再将滤膜转移到固体培养基表面，培养并作微生物计数。应注意过滤的体积、截留微生物的数量，保证足够的检出率（足量的过滤量）和可计数性（截留的微生物太多就没法计数了）。 每批产品都进行的耐热性测试并非D值测试，而是所谓沸腾试验－一种定性试验。将截留了微生物的滤膜放入装有同种产品药液的试管中，进行水浴煮沸15分钟或更长时间，对该药液进行无菌检查，如阴性则通过，呈阳性，说明污染菌是耐热菌，则需要进一步测D值。99%以上的检品是非耐热菌。 D值测定相当复杂，请参考《药品生产验证指南》（蓝皮书，国家药监局编）第三篇第三章第一节，有详细介绍。 * 精品PPT | 借鉴参考 附：D值测定法 生物指示剂耐热性测定仪 　　　在灭菌过程中形成矩形脉冲曲线，即升温及降温极快，能保持恒定的温度，曝热过程容易计时。 假设条件 　　　微生物存活数从N0到灭菌终点始终与曝热时间呈线性关系（对数规则）。 * 精品PPT | 借鉴参考 方法一：不生长分数法（阴性分数法） ①　最可能数测定法 　　　将一组样品（至少10个样本）置于设定灭菌温度下，加热到设定时间后，分别作无菌检查。 当灭菌温度T为121℃时，可用下式计算D值 DT＝F0/lgN0-lg[2.303lg(n/q)] 式中：n――样品总数 　　　　q――曝热处理后无菌样品数 * 精品PPT | 借鉴参考 方法一：不生长分数法（阴性分数法） ②　估算法 　　　系列组（每组至少10个样品），置于预定温度下，按等差递增的方式设置不同的曝热时间，分别进行热处理，处理后的样品放入无菌液体中适宜温度下培养，记录每组样品中没有微生物生长的样品数，按下表方式进行排列 * 精品PPT | 借鉴参考 选择从全部生长的最长曝热时间组（B）到显示完全不生长最短曝热时间组（G）之间的数据计算D值。 首先计算出孢子完全杀灭时间t t=tk-d/2-(d/10×∑f) 　式中：tk――阴性分数范围下限（全部样品不长菌所需的最短曝热时间） 　　　　d ――等差值 * 精品PPT | 借鉴参考 方法一：不生长分数法（阴性分数法） 然后根据下式计算D值 D＝t/(lgN0+0.2507) 假设N0＝105，其它实验数据如上表所示，则D值的计算为 　 　t＝15－2/2-（2/10×26）=8.8(min) 　 　D=8.8/(5+0.2507)=1.7(min) * 精品PPT | 借鉴参考 方法二：存活曲线法 　测试两个样品（至少），在设定温度下（如121℃）分别取两个不同的曝热时间，然后将热处理后的样品及对照样品（未经热处理的样品）采用平皿计数法或经薄膜过滤并置于适当培养基表面培养的方法对每个样品中存活微生物进行计数（NS），将实验数据的平均值取常用对数（lg），对相应的曝热时间F0作图，可得如图所示的存活曲线 * 精品PPT | 借鉴参考 在存活曲线上，从微生物差值为一个对数单位的二个点分别作X轴和Y轴的平行线，在X轴上即可求得D值，也可用下面的公式计算 D121℃＝F0/（lgN0－lgNS） 举例：D值测定中曝热时间为5min,而N0＝105，NS＝102，则 D121℃＝5/(lg105- lg102)=5/3=1.7(min) * 精品PPT | 借鉴参考 方法二：存活曲线法 从上图中也可以看出，D值为存活曲线斜率的负倒数（－1/K），因此D值可在存活曲线的直线段，用未加权最小二次线性回归分析法按下式求得 式中　u――曝热时间 　　　　y－－曝热条件下存活菌落数的平均值 　　　　n――所得初验数据的组数 * 精品PPT | 借鉴参考 注射剂生产常见问题问答 7、对于选择残存概率法最终灭菌的产品，如果灭菌前每批检测微生物限度，而微生物限度检测时间为72小时，而实际连续生产的生产周期远远短于72小时，其检测结果仅是对灭菌后产品无菌保证水平的参考吗？　　答：显然灭菌前微生物含量检查的结果远远滞后于生产过程，其目的不是用于对当批产品的中间控制。该检查的意义主要有两项： 第一，用于评价该批产品的无菌保证水平； 第二，长期积累了多批灭菌前微生物含量的数据后，可以对生产系统在灭菌前的各工艺步骤的微生物污染状况作整体的评估，从而指示该生产体系是否有效地将微生物污染控制在很好的水平，是否需要进行改进等。 * 精品PPT | 借鉴参考 注射剂生产常见问题问答 8、请问微生物种类、数量研究的方法？所需的设备？如果采用残存概率法，是否在生