3-1 微生物学第三模块实验一 水中菌落总数和大肠菌群数量测定 (1).pptVIP

食品安全问题日益严重！ 2015-05-19漳州市珍桂食品有限公司生产的知名“来伊份”手撕肉条菌落总数超标. 2015-05-14国内全部100家生产企业和部分进口婴幼儿配方乳粉抽检当中，23家国内生产企业和4家进口经销商抽检样品不合格。杨凌圣妃乳业有限公司等企业的2批次样品检出菌落总数超标。 2015-04-06国家食品药品监督管理总局针对深受学生群体偏爱的“辣条”发布食用安全消费提示，指出抽检结果显示部分产品存在超范围、超限量使用防腐剂、色素以及菌落总数超标等问题。 在引起公众关注的同时也引起了广泛的质疑： 1、菌落总数超标是否等于食品不安全？ 2、测试方法是否科学？ 3、央视是否有权公布结果？ 央视曝光，在北京崇文门真功夫、肯德基、麦当劳三大快餐店取回可食用冰块，并抽取马桶水样品后，送往北京理化中心进行对比检测。检测结果显示，3家快餐店的菌落总数均超出标准。 实验十 水中菌落总数和大肠菌群数量测定实验十一 肠道杆菌的抗原性检测 实验十 水中菌落总数和大肠菌群数量测定 权威 科学 标准 严格 水质微生物检查通常包括两个项目：菌落总数和大肠菌群测定。 菌落总数是指1mL检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，CFU)数，故其单位应是cfu/mL。它反映的是检样中活菌的数量。 大肠菌群是指在37℃、24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称。大肠菌群普遍存在于肠道内，若在肠道以外的环境中发现，就可以认为这是由于人或动物的粪便污染造成。 国家饮用水标准规定：饮用水中菌落总数每毫升不超过100个； 总大肠菌、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌不得检出。 实验目的 了解水质状况与细菌数量在饮水中的重要性； 学习并掌握各类水样采集和细菌活菌计数的方法； 了解平板菌落计数法在有关行业的微生物检验中的作用与意义。 实验原理 1、平板菌落总数测定法 微生物在固体培养基上所形成的一个菌落代表一个单细胞，因此通过统计菌落数就可计算出样品中含有的活菌数。 菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。 由于现有条件不能满足样品中厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌等微生物的生理需求，故上述难以繁殖生长。因此菌落总数并不等于样品中的所有微生物的总数。但在一定范围和条件下，菌落总数与样品中微生物数量成正比关系，所以菌落总数可以反映环境微生物的数量和洁净程度。 实验原理 2、多管发酵法来测定水样中的大肠菌群数 利用大肠菌群微生物在乳糖蛋白胨液体培养基发酵产酸产气的特征，结合统计学的方法，利用MPN (most probable number，最可能数)检索表，快速测定水样中总大肠菌群最可能数(MPN)值。 实验器材 培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基(琼脂为1.5%)、乳糖发酵管、伊红美兰培养基； 水样采集器（灭菌处理），1.5mL离心管，移液器，枪头； 无菌水，250ml三角瓶（灭菌处理），灭菌培养皿。 实验步骤 一、水样采集 1、自来水的采集：用酒精灯火焰对自来水龙头灼烧1分钟灭菌，开放水龙头流水5分钟后将水龙头关小，在水龙头旁拔去灭菌三角瓶塞，迅速将瓶口对准水龙头接取水样若干，盖好瓶塞待分析。 2、环境水的采集：用ETC-1A采水器采集0.5-1M水深样品，然后置于灭菌器皿待分析。 二、平板菌落总数测定 1、自来水样品(每组2块) 倾注法制平板（注意无菌操作）： 吸取1mL自来水样分别加入2个灭菌培养皿中； 倾注约15mL经融化并冷却至45℃左右（以不烫手为宜）的牛肉膏蛋白胨培养基，立即在桌面作平面旋转混用。 注意样品与培养基混合时，可将皿底在平面上先向一个方向旋转，然后再向相反方向旋转，使其充分混匀。旋转时小心，不要使混合物溅到皿边上方。 皿底琼脂凝固后将平皿倒置培养于37℃培养24h。 2、环境水样品(每组4块) 将样品在无菌水试管中做10倍梯度稀释； 取10-1和10-2稀释度的环境水样各1ml放入不同的培养皿内，倾注法混匀，每个稀释度做2个平皿，然后置于37℃倒置培养24h。 三、菌落计数 1、自来水样品：两个平板的平均菌落数即为1ml水样的菌落总数； 2、环境水样品： (1)平皿菌落数的选择：先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不宜采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的面积大小不足平板的一半，而其余的一半平板菌落分布又比较均匀，则可将此一半的菌落数乘以2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 (2)稀释度的选择 首先当只有一个稀释度的平均菌落