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选修3易考知识点背诵
专题1 ? 基因工程
基因工程概念
基因工程别名
?基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
?生物体外
操作对象
?基因
操作水平
?DNA分子水平
基础过程
?剪切→ 拼接→导入→ 表示
结果
?产生人类需要基因产物
特点
?打破种界限,定向改造生物
本质
?基因重组
(一)基因工程基础工具
1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)
(1)起源:关键是从原核生物中分离纯化出来。
(2)功效:能够识别双链DNA分子某种特定核苷酸序列,而且使每一条链中特定部位两个核苷酸之间磷酸二酯键断开,所以含有特异性。
(3)结果:经限制酶切割产生DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。
2.“分子缝合针”——DNA连接酶
(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)比较:
①相同点:全部缝合磷酸二酯键。
②区分:E·coliDNA连接酶起源于T4噬菌体,只能将双链DNA片段互补黏性末端之间磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端之间效率较低。
(2)和DNA聚合酶作用异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已经有核苷酸片段末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段末端,形成磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——载体
(1)载体含有条件:①能在受体细胞中复制并稳定保留。
②含有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。
③含有标识基因,供重组DNA判定和选择。
(2)最常见载体是质粒,它是一个裸露、结构简单、独立于细菌染色体之外,并含有自我复制能力双链环状DNA分子。
(3)其它载体: 噬菌体、动植物病毒
(二)基因工程基础操作程序
第一步:目标基因获取
1.目标基因是指:是大家所需要转移或改造基因
2.获取目标基因方法基因文库 、人工合成、 PCR技术
3.原核基因采取直接分离取得,真核基因是人工合成。人工合成目标基因常见方法有反转录法_和化学合成法_。
4.PCR技术扩增目标基因
(1)原理:DNA双链复制
(2)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链合成。
第二步:重组DNA分子
1.目标:使目标基因在受体细胞中稳定存在,而且能够遗传至下一代,使目标基因能够表示和发挥作用。
2.组成:目标基因+开启子+终止子+标识基因+复制原点
(1)开启子:是一段有特殊结构DNA片段,在基因首端,是RNA聚合酶识别和结合部位,能驱动基因转录出mRNA,最终取得所需蛋白质。
(2)终止子:也是一段有特殊结构DNA片段 ,在基因尾端。
(3)标识基因作用:是为了判定受体细胞中是否含有目标基因,从而将含有目标基因细胞筛选出来。常见标识基因是抗生素基因。
第三步:转化受体细胞
1.转化概念:是目标基因进入受体细胞内,而且在受体细胞内维持稳定和表示过程。
2.常见转化方法:
将目标基因导入植物细胞:采取最多方法是 农杆菌转化法,其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。
将目标基因导入动物细胞:最常见方法是 显微注射技术。此方法受体细胞多是 受精卵。
将目标基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ,最常见原核细胞是 大肠杆菌 ,其转化方法是:先用 Ca2+ 处理细胞,使其成为 感受态细胞 ,再将 重组表示载体DNA分子 溶于缓冲液中和感受态细胞混合,在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。
3.重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表示载体受体细胞依据是标识基因是否表示。
第四步:目标基因检测和表示
1.首先要检测 转基因生物染色体DNA上是否插入了目标基因,方法是采取 DNA分子杂交技术。
2.其次还要检测 目标基因是否转录出了mRNA,方法是采取 用标识目标基因作探针和 mRNA杂交。
3.最终检测 目标基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取 蛋白质,用对应 抗体进行抗原-抗体杂交。
4.有时还需进行 个体生物学水平判定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
(三)基因工程应用
1.植物基因工程:抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物品质。
2.动物基因工程:提升动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药品。
3.基因诊疗:把正常外源基因导入病人体内,使该基因表示产物发挥作用。
(四)蛋白质工程概念
蛋白质工程是指以蛋白质分子结构规律及其生物功效关系作为基础,经过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一个新蛋白质,以满足人类生产和生活需求。(基因工程在标准上只能生产自然界已存在蛋白质)
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