还原糖的测定十一月整理.pdfVIP

(1) 提取液的制备 常用的提取剂有水和乙醇溶液，提取液的制备方法要根据样的性状而定，但应遵循以下原则： ① 取样量和稀释倍数的确定，要考虑所采用的分析方法的检测范围。一般提取经净化和可 能的转化后，每毫升含糖量应在0.5~3.5mg 之间，提取10 克含糖2% 的样品可在100 毫升容 量瓶中进行；而对于含糖较高的食品，可取5~10 克样品于250 毫升容量瓶中进行提取。 ②含脂肪的食品，如乳酪， 巧克力，蛋黄酱及蛋白杏仁糖等，通常需经脱脂后再以水进行 提取。一般以石油醚处理一次或几次，必要时可以加热。每次处理后，倾去石油醚层（如分 层不好，可以进行离心分离），然后用水提取。 ③ 含大量淀粉和糊精的食品，如粮谷制品，某些蔬菜，调味品，用水提取会使部分淀粉， 糊精溶出，影响测定，同时过滤也困难，为此，宜采用乙醇溶液提取。乙醇溶液的浓度应高 到足以使淀粉和糊精沉淀，通常用70~75%的乙醇溶液。若样品含水量较高，混合后的最终 浓度应控制在上述范围内。提取时可加热回流，然后冷却并离心，倾出上清液，如此提取 2~3 次，合并提取液，蒸发除去乙醇。用乙醇溶液作提取剂时，提取液不用除蛋白质，因为 蛋白质不会溶解出来。 ④ 含酒精和二氧化碳的液体样品，通常蒸发至原体积 1/3~1/4，以除去酒精和二氧化碳。但 酸性食，在加热前应预先用氢氧化钠调节样品溶液至中性，以防止低聚糖被部分水解。 ⚫ ⑤ 提取固体样品时，为提高提取效果，有时需加热，加热温度一般控制在。40~50 ℃， 一般不超过80℃，温度过高时右溶性多糖溶出，增加下步澄清工作的负担，用乙 醇 做提取剂，加热时应安装回流装置。 （2 ）提取液的澄清 作为澄清剂必需具备以下几点要求 ：①能较完全地除去干扰物质②不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质③过 剩的澄清剂应不干扰后面的分析操作，易于除掉。 常用三种澄清剂： 中性醋酸铅[Pb （CHCOO)2•3H2O] 乙酸锌和亚铁氰化钾溶液 硫酸铜和氢氧化钠溶液 澄清剂的用量 样液除铅 2 食品中还原糖的测定 3 直接滴定法、 4 高锰酸钾法、 5 萨氏法、 6 碘量法 ⚫ 2.1 直接滴定法 ⚫ (1) 原理 ⚫ (2) 适用范围 ⚫ (3) 试剂 ⚫ (4) 测定方法 ⚫ (5) 结果计算 1 ⚫ (6) 说明与讨论 (1) 原理 将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很 快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基 蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉 淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为 滴定终点。根据样液消耗量可计算还原糖含量。 (2) 适用范围及特点 本法又称快速法，它是在蓝-爱农容量法基础上发展起来的，其特点是试剂用量少，操作和 计算都比较简便、快速，滴定终点明显。适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深 色果汁等样品时，因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是国家标准分析 方法 (3) 试剂 ⚫ ①碱性酒石酸铜甲液：称取 15g 硫酸铜 及0.05g 四甲基蓝，溶于水中并稀释到1000 ml ⚫ ② 碱性酒石酸铜乙液:取50g 酒石酸钾钠及75g 氢氧化钠，溶于水中，在加4g 亚铁 氰化钾，完全溶解后，再用水稀到 1000 ml，储存于橡胶塞玻璃瓶内。 ⚫ ③ 乙酸锌溶液：称取21.9g 乙酸锌，加3 ml 冰醋酸 ，加水溶解并稀释1000 ml。 ⚫ ④ 106g/L 亚铁氰化钾溶液。 ⚫ ⑤ 盐酸。 ⚫ ⑥ 葡萄糖标准液：准确称取1.000 g 干燥至恒量的 纯葡萄糖，加水溶解后加入5 ml 盐酸，并以水稀释至1000 ml。 (4) 测定方法 样品处理 碱性酒石酸铜溶液的标定 样品溶液预测 样品溶液 测定 ① 样品处理 取适量样品，按第二节中的原则对样品进行提取，提取液移入250 ml 容量瓶中，慢慢加入 5 ml 乙酸锌的溶液和5ml 亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，摇匀后静至30 分钟。用干燥滤纸 过滤，弃初滤液，收集滤液备用。 ② 碱性酒石酸铜溶液的标定 准确吸取碱性酒石酸铜