基于超高效液相色谱-飞行时间-串联质谱技术的食用油中脂质成分分析研究.pdfVIP

摘 要 脂质作为人类赖以生存的营养素之一，发挥着许多重要的生理功能。要进一步研究脂质在分 子生物学等领域中的作用和功能，就必须对其准确地识别和量化。然而，脂质的高度结构多样性 对脂质组学提出了重大挑战，尤其是天然植物油中含量高达95%~98%的甘油三酯。 相较于质谱直接进样法（Shotgun mass spectrometry ，Shotgun-MS ）存在样品基质效应明显等 缺点，高效液相色谱-质谱联用技术的发展大大推动了脂质组学的进一步发展。样品中的各类脂质， 首先在液相色谱中得到分离，再依次进入质谱进行鉴定，较大程度的提高了脂质分析的选择性和 灵敏度，且一定程度减少了基质效应。飞行时间质谱（Time of flight- mass spectrometry ，TOF-MS ） 具有极高的质量分辨率和精度、无限的质荷比范围和高速采集能力；超高效液相色谱具有更快速、 更灵敏、更充分的色谱分离，二者串联结合将大大提高复杂生物样本中脂质结构鉴定的效率。 本课题主要以食用油中的脂质为研究对象，首先建立了超高效液相色谱-飞行时间- 串联质谱 高覆盖定性分析技术 （UPLC-TOF-MS/MS ），而后建立了基于该技术的甘油三酯定量方法，从而 实现高通量、高覆盖、高效率的脂质定性定量分析。并将上述方法应用于我国特有油料资源青刺 果油的脂质成分分析，以及食用油的掺假鉴定。此外，本实验还基于上述方法，初步探究了不同 菜籽油中微量脂质组分的含量和影响因素。研究结果如下： 1. 建立了超高效液相色谱-飞行时间- 串联质谱的脂质分析方法，并对青刺果油所含脂质的种 类、组成、相对含量进行了分析。结果显示，从青刺果油中共鉴定出169 种脂质，包括76 种磷 脂，84 种甘油酯和9 种糖脂；其中磷脂、甘油酯和糖脂的主要成分分别为：磷脂酰肌醇、甘油三 酯和双半乳糖甘油二酯；超高效液相色谱-飞行时间-串联质谱技术具有高灵敏度、高准确度和高 通量等优点，可为油料脂质研究提供可靠的分析技术平台。 2. 建立了基于超高效液相色谱-飞行时间- 串联质谱技术的甘油三酯绝对定量方法，一定程度 上提高了甘油三酯定量的准确性。利用20 种单脂肪酸甘油三酯标准品、2 种混脂肪酸甘油三酯标 准品、1 种氘代标记甘油三酯标准品，绘制标准曲线，计算响应因子、拟合校准公式。结果显示， 相较于单内标定量法，准确度提高了82%。 3. 利用上述方法对市场选购的9 种不同菜籽油中所含的磷脂、脂肪酸、维生素E、植物甾醇 进行对比分析。结果显示，微量脂质组分含量与品牌差异关系不明显，但与等级和加工工艺关联 性较强。可基于微量脂质组分含量、加工工艺和等级建立品质评定和价格预测模型。 关键词：超高效液相色谱-飞行时间- 串联质谱，脂质，甘油三酯，绝对定量，食用油 Abstract As one of the nutrients on which human beings depend for survival, lipids play many important physiological functions. To further study the role and function of lipids in molecular biology and other fields, it is necessary to accurately identify and quantify them. however, the high structural diversity of lipids poses a major challenge to lipidomics, especially in natural vegetable oils containing up to 95~98% triglycerides. Compared with the obvious defects of sample matrix effect in shotgun mass spectrometry, the development of high performance liquid chromatography-mass spectrometry technology has greatly promoted the further development of lipidomics. All