产量和取浆时间对蜂王浆品质的影响.pdfVIP

摘 要 蜂王浆是哺育蜂咽下腺和上颚腺等腺体的分泌物，是一种天然的功能性食品。蜂王浆成分复 杂，主要包括水、蛋白质、脂类、氨基酸、糖类、维生素等，其丰富的生物活性成分是蜂王浆具 有抗肿瘤、抗衰老等医疗保健功效的基础。为提高蜂王浆产量，我国从意大利蜜蜂（意蜂，Apis mellifera ligustica ）中培育出了蜂王浆高产蜜蜂（浆蜂），并尝试通过改变移虫后的取浆时间来提 升蜂王浆品质。已有研究报道了蜂王浆产量和取浆时间对蜂王浆总蛋白和 10-羟基-2-癸烯酸 （10-HDA ）等成分含量的影响，但仍存有分歧，而且对其他小分子成分的影响尚不清楚，制约 了蜂王浆品质的总体评价。 本课题旨在利用基于超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS ）的非靶向代谢组学技术， 比较浆蜂和意蜂在移虫后24 h 、48 h 和72 h 生产的蜂王浆小分子化合物的组成和含量，解析蜂王 浆产量和取浆时间对蜂王浆小分子成分的影响，并比较蜂王浆含水量和抑菌活性，从整体上判断 蜂王浆的品质，确定最佳的取浆时间，为我国蜂王浆优质高效生产提供依据。 为优化蜂王浆代谢物的提取方法，分别使用浓度分别为50%和80%的3 种溶剂 （甲醇、乙醇 和乙腈）提取蜂王浆代谢物，运用UPLC-HRMS 进行检测。发现 80% 甲醇或80%乙醇组得到的 代谢特征离子数量更多，而80%乙腈组最少且重复性最差。已鉴定的中低极性物质在50%溶剂组 丰度较低，强极性物质在80%乙腈组丰度最低。因此，80% 甲醇或80%乙醇是提取蜂王浆代谢物 的最佳溶剂。 通过浆蜂和意蜂3 个取浆时间的蜂王浆代谢组学分析，鉴定了77 个高丰度小分子化合物。 与意蜂相比，浆蜂蜂王浆不仅产量提高了9 倍，而且主要活性成分的含量差异不显著，其中72 h 蜂王浆的 10-HDA （1.98%）和水分平均含量（67.26% ）均符合我国优质蜂王浆的国家标准，抑 菌活性也未发生显著变化，以上结果表明浆蜂蜂王浆在产量显著提高的同时，仍然保持了优良的 品质。浆蜂移虫后24 h 蜂王浆的平均含水量显著下降（58.57% ），10-HDA 、乙酰胆碱、牛磺酸等 活性成分含量显著升高，因而具有更高品质，但由于产量显著降低且耗费劳动力，不利于蜂王浆 生产。移虫后48 h 和72 h 的蜂王浆代谢谱高度一致，含水量和产浆量均无显著差异，但48 h 生 产方式的移虫数量比72 h 增加50%，更耗费劳动力，所以72 h 优于48 h 取浆。 本研究首次将反相液相色谱（RPLC ）和亲水相互作用色谱（HILIC ）两种分离方法分别联合 高分辨质谱技术，进行蜂王浆非靶向代谢组学分析。优化了蜂王浆代谢物提取方法，为后续蜂王 浆代谢组学研究提供了技术支持；阐明了浆蜂蜂王浆优质高产的特性，揭示了移虫后收取蜂王浆 的最佳时间，为蜂王浆优质高效生产提供了科学依据。 关键词：蜂王浆，蜂王浆高产蜜蜂，代谢组学，取浆时间，高分辨质谱 I Abstract Royal jelly (RJ), a natural secretion from the hypopharyngeal and mandibular glands of nurse bees, is a functional food with health-promoting properties. RJ contains a wide cascade of components such as water, proteins, lipids, amino acids, carbohydrates, and vitamins. Bioactive compounds in RJ contribute to the diverse range of pharmaceutical effects of RJ, such as anti-tumor and anti-aging. To augment RJ production from the honeybee colonies, a high RJ-producing honeybee strain (RJBs) in China ha