培养基促生长实验操作.docx

目的 制订培养基灵敏度实验操作，是为了规范、统一培养基灵敏度检测，确保微生物检测准 确、安全进行。 范围 适用于所有配制好并灭菌的培养基。 编写依据 EP6.5 术语 无 职责 QC 卫检组人员负责培养基的配制、灭菌、灵敏度实验。 内容 使用的设备、器具 生物安全柜、无菌培养皿、无菌刻度吸管或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、酒精灯等 使用的菌株 EP检测用ATCC的菌株： 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus ATCC 6538 大肠埃希菌 Escherichia coli ATCC 8739 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 枯草芽孢杆菌 Bacilllus subtilis ATCC 6633 沙门氏菌 Salmonella enterica subsp ATCC 14028 白色念珠菌 Candida albicans ATCC 10231 黑曲霉 Aspergillus niger ATCC 16404 培养基灵敏度检测所用的菌株传代次数不得超过 5 代, 并采用适宜的菌种保藏技术，以 保证试验用菌株的生物学特性。 检测频率 每批配制、灭菌后的培养基均应做灵敏度测试。 操作方法 对照标准培养基 用已经过实验证明合格的培养基或购买的有质量证书的成品平皿培养基作为对照标准培 养基. 实验培 养基 将琼脂类的实验培养基加热融化后，冷却至 45 C左右，以无困的方式在无困培养皿中注 入15?20ml，备用。液体类的培 养基 直接使用。 菌悬液的制备 细菌菌悬液的制备 方法一：取细菌的斜面培养物1耳匙接种在酪蛋白大豆消化肉汤培养基中 30?35C培养 18?24h，取上述培养物用无菌水按10倍系列稀释，分别制成10-7?10-8的菌悬液备用。 霉菌菌悬液的制备 取白色念珠菌的斜面培养物1耳匙接种在沙氏琼脂斜面上于 20?25C培养24?48h,加 入无菌水4ml制成原液，取上述原液按10倍系列稀释，分别制成10-6?10-7的菌悬液备用。 取黑曲霉的斜面培养物加入无菌水 4ml制成抱子悬液，取上述抱子悬液按10倍系列稀释， 分别制成 10-6?10-7的菌悬液备用。 方法二： 直接用杭州微球生物技术有限公司的产品 - 培养基灵敏度指示剂， 该产品已经帮 我们精确控制了细菌数量，只要直接拿稀释液稀释下就可以直接取到 10?100CFU式验菌。使 用方便，数量精确。推荐用此方法操作。 培养基的生长促进实验 琼脂类培 养基 的生长促进实验 每株菌用 2 个实验培养基平皿，用表面涂布法在每个平皿表面接种 0.1 ?0.5ml 的菌悬 液（约10?100CFU式验菌），同时用2个对照标准的培养基平皿做对照，接种相同量的菌悬 液试验，在规定温度下培养 , 取出平皿点计菌落数。 实验培养基上的微生物数量应为对照培养 基上微生物生长数量的 70%-150%范围内。（注：每种培养基生长促进实验的具体菌株见附录 1） 液体类培 养基 的生长促进实验 每株菌用2管（或瓶）实验培养基，接种0.1?0.5ml的菌悬液（约10?100CFU式验菌）， 同时用 2 个对照标准的培养基或用已知合格的酪蛋白大豆消化琼脂平皿做对照，接种相同量 的菌悬液试验，在规定温度下培养 ,对比或计数，在规定时间内能生长菌落为合格。 培 养基 的生长促进和抑制特性试验 6.4.5.1 液体培养基的生长促进特性试验 接种0.1?0.5ml的菌悬液（约10?100CFU式验菌）于一定量适合的培养基。在特定温 度下培养，培养时间不超过试验中规定的最短期限。与对照标准的培养基获得的微生物生长 相比，接种微生物的生长应明显。 固体培养基的生长促进特性试验 采用表面涂布法，在每一块平皿上接种 0.1?0.5ml的菌悬液（约10?100CFU式验菌） 适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间不长于试验中规定的最短期限。接种微生物的生 长与对照标准的培养基获得的微生物生长相当。 液体或固体培 养基 的抑制特性试验 用适当培养基接种至少100 CFU适宜微生物。在特定温度下培养，培养时间至少为试验 中规定的最长期限。无受试微生物生长。 （注：每种培养基生长促进和抑制特性试验的具体菌株见附录 1） 7附录 附录1培养基生长促进和抑制特性表 附录1: 培养基的生长促进、抑制特性表 锂K甘 培养基 [ 特性 受试菌株 培养时间 培养温度 生长促进 金黄色葡萄球菌 3天 30-35 C 酪蛋白大豆消化 琼脂 铜绿假单胞菌 3天 30-35 C 枯草芽抱杆菌 3天 30-35 C 白色念珠菌 5天 30-35 C 黑曲霉 5天 30-35 C 酪蛋白大豆消化 肉汤 生长促进 金黄色葡萄球菌 3天 30-35 C 铜绿假单胞菌 3天 30-35