血清使用说明解冻灭活分装.docVIP

血清使用说明 胎牛血清与小牛血清 某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可。 储存条件 血清一般储存于－ 20℃，同时应避免反复冻融。 若存放于 4℃时，请勿超过一个月 。血清中絮状沉淀的处理 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白，这是正常特性，不会影响产品性质。 离心血清（ 400g，1-2 分钟）或简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里。 大多情况轻轻摇动沉淀并加热至 37℃就会再溶解。 一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤。 使用浓度 一般为 5－ 20％，最常用是 10％。过多血清容易使培养中的细胞发生变化， 特别是一些二倍体的无限细胞系，迅速生长之后容易发生恶性转化。解冻方法 血清从冰箱取出后应慢慢地解冻。最好在 4℃低温冰箱里放置一天或直到完全融化为止。如果时间不允许低温解冻 , 可参考以下解冻方法： 将血清从冰箱里取出后，在室温下放置 15-20 分钟。 然后将血清放置在 37℃水浴槽里。过高温度会导致血清出现浑浊现象。不要让水淹没装有血清的瓶子。 每隔 5 分钟左右适当摇晃瓶子，直到完全地解冻为止。 热灭活方法 加热可以灭活补体系统。 激活的补体参与溶解细胞事件， 刺激平滑肌收缩， 细胞和血小板释放 组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养 ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。若必须做血清的热灭活，请遵守 56℃， 30 分钟的原则，并且随时摇晃均匀。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 用上述描述的方法将血清在低温冰箱或室温下解冻。 在血清解冻时，将一个容器装入适量的水，用于模拟装有血清瓶子在热处理过程中检测瓶内水的温度。容器大小、质地和装水的量最好与装血清的瓶子相同或相似。 待血清彻底解冻时，将含有血清的瓶子放在预热的 56℃水浴里，不要将含有血清的瓶子让水淹没或接近瓶子的盖子，以免导致污染。 在开始加热处理时，要及时使用温度计测定模拟瓶内水的温度。 在预热期间，每隔 3-5 分钟要适当摇晃含有血清和水的瓶子，确保瓶内液体均匀加热。 6. 一旦模拟瓶内的水温达到 55.8 ±0.5 ℃时，开始计时，并在此温度范围内热处理 30 分钟， 然后立即放在冰上冷却。 为防止在热处理过程中由蛋白质变性而导致的浑浊和沉淀现象，热处理时应注意下列事项： 不要用高于 25℃以上的温度加快解冻速度。 在热处理之前，要使血清彻底融解。 不要使热处理的温度高于 56.3 ℃ 热处理时间不要长于 30 分钟。 在加热过程中一定要定时摇动血清。避免事项 避免反复冻融 长时间储存在 2－ 8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。 避免产生沉淀 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 血清分装时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡） ，使温度与成分均一。 勿直接由 -20 ℃直接至 37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 勿将血清置于 37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受 到破坏，从而影响血清的品质。 建议事项 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时， 您应该在两到三周内使用它。 因为一些抗生素 和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。（ 100U/mL青霉素； 100μg/mL链霉素） 500ml 血清分装过程： 准备灭菌的血清瓶 慢慢解冻，最后放在室温平衡下温度。 灭活 水浴锅， 56℃，30 分钟，并且随时摇晃均匀。取出，立即放在冰上冷却 | 自然冷却至室 温（约需 1-3 小时）。在热灭活过程中，定时适当摇动可以减少沉淀现象的发生。 无菌分装 转入无菌间，在超净台内将血清分装入 50-100ml 血清瓶中（注意预先要将血清轻 轻摇动数周、混匀；用吸液管吹出血清时要注意：不要吹出气泡（ 血清很粘稠，很容易产生气 泡；如果产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下 ）封口，并于 - 20℃保存备用。 使用前融化，最好置于 4℃融化。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。