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【实验题目】
细胞膜通透性实验
【实验目得】
1、观察溶血现象并掌握其发生机制、?
2、了解细胞膜得渗透性及各类物质进入细胞得速度。
【实验材料与用品】
1。?试剂:0、85% NaCl溶液、0、085% NaCl溶液、0。8mol/L甲醇溶液、0。8mol/L丙三醇溶
液、6% 葡萄糖溶液、2% TritonX-100?
2.?器具:离心管、试管架、滴管、显微镜、离心机
3.?材料:鸡血红细胞
【实验原理】
细胞膜就是细胞与环境进行物质交换得选择性屏障,它就是一种半透膜,可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞得方式就是不同得,水就是生物界最普遍得溶剂,通透性高(肾小管、肠上皮、植物根细胞更高),水分子可以从渗透压低得一侧通过细胞膜向渗透压高得一侧扩散,这种现象称为渗透。渗透作用就是细胞膜得主要功能之一、
溶血现象
将红细胞放在低渗盐溶液中,水分子大量渗到细胞内使细胞涨破,血红蛋白释放到介质当中,介质由不透明得细胞悬液变为红色透明得血红蛋白溶液(此时得细胞膜收缩,会略有不溶性内容物),这种现象称为溶血。
红细胞在等渗盐溶液中短时间之内不会发生溶血,但就是由于红细胞得细胞膜对不同物质得通透性不同,时间久了,膜两侧得渗透压平衡会被打破,也会发生溶血。
由于各种溶质透过细胞膜得速度不同,因此发生溶血得时间也不相同、发生溶血现象所需得时间,可以作为测量某种物质进入红细胞速度得指标。即溶血时间对应着穿膜速度。
物质穿膜运输得类型
(1)被动运输(不耗能)
被动运输分为简单扩散(顺浓度梯度扩散)与协助扩散。(通道:载体蛋白、通道蛋白)
主动运输(耗能)
需要跨膜载体蛋白得协助,这些载体蛋白起到泵得作用,有选择性地把专一溶质逆浓度梯度得穿膜运输、
影响物质穿膜通透性得因素
脂溶性越大得分子越容易穿膜(非极性得物质比极性得物质更容易溶于脂类物质)
小分子比大分子更容易穿膜(小得非极性分子,如O2 、CO2等)
不带电荷得分子容易穿膜(离子难溶于脂质物质,离子带水膜使体积增大)
亲水性分子与离子得穿膜要依赖于专一性得跨膜蛋白
【实验步骤】
大体流程
6只试管分别滴加50%红细胞悬液1滴取6只试管分别加入等量得不同溶质配置50%得鸡血红细胞悬液
6只试管分别滴加50%红细胞悬液1滴
取6只试管分别加入等量得不同溶质
配置50%得鸡血红细胞悬液
在显微镜下观察细胞形态混匀后,观察并记录溶血时间
在显微镜下观察细胞形态
混匀后,观察并记录溶血时间
具体操作
取鸡血6ml,加0、85%NaCl溶液4ml,在1000r/min条件下离心5分钟;(RBC压积量不
少于 0、6mol)
将上述离心后得红细胞按沉淀量配成50%浓度;(总体积应不少于1.2ml)
每组取6支试管,分别加入如下溶液各3ml:
(1)0、85%NaCl溶液
(2)0、085%NaCl溶液
(3)0.8mol/L(0、3mol/L等渗)甲醇溶液
(4)0、8mol/L(0.3mol/L等渗)丙三醇溶液
(5)6%(5%等渗)葡萄糖溶液
(6)2%(1。5%等渗)TritonX—100
4。 向上述6支试管中分别加入50%红细胞悬液1滴,轻摇混匀,观察试管中就是否有溶血现象发生 (观察时间1小时),记录溶血时间,并于显微镜下观察各溶液得细胞、
【实验结果与分析】
= 1 \* ROMAN \* MERGEFORMAT I。实验结果
图1:0。85% NaCl溶液 图2:0、085% NaCl溶液 图3:0。8mol/L甲醇溶液
图4:丙三醇溶液(20min) 图5:丙三醇溶液(40min) 图6:丙三醇溶液(60min)
图7:葡萄糖溶液 图8:TritonX-100
= 2 \* ROMAN \* MERGEFORMAT II。观察记录表
编号
溶液类型
就是否溶血
溶血时间
现象记录
1
0。85% NaCl溶液
不溶血
/
溶液呈暗红色乳浊液,未发生溶血,作为对照组
2
0、085% NaCl溶液
完全溶血
6s
溶液呈鲜亮得红色,完全溶血,作为对照组。
3
0。8mol/L甲醇溶液
完全溶血
35s
溶液呈鲜亮得红色;
完成溶血得时间很短
4
0、8mol/L丙三醇溶液
不完全溶血
20min
溶液短时间内仍呈暗红色,透明度不高;
溶血速度缓慢,每隔10min进行观察,发现显微镜下个别细胞形态有所改变
5
6
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