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视网膜组织病理结构改变 摘要：观察牛磺酸对 N甲基D天冬氨酸 兴奋毒性引起的大鼠视网膜组织结构及超 微结构损伤的保护作用。方法在大鼠玻璃体 腔内每眼注射5p l4mmol/LNMDA造成视网膜 兴奋毒性损伤模型，20只成年雄性SD大鼠 随机分为4组：正常对照组；NMD酒；NMDA+ 牛磺酸干预组；磷酸盐缓冲液对照组。玻璃 体注射后第4d,测量视网膜总厚度及内层厚 度并用透射电镜观察视网膜超微结构。 结果 NMDA!大鼠视网膜总厚度尤其是视网膜内 层厚度变薄，超微结构显示内核层及节细胞 层神经元发生变性改变，25mg/kg牛磺酸干 预可有效保护视网膜组织结构，削弱 NMDA 引起的视网膜超微结构损伤。 结论牛磺酸在 体内可有效保护NMDI起的视网膜组织结 构及超微结构损伤。 关键词：牛磺酸N甲基D天冬氨酸兴奋 毒性视网膜超微结构 兴奋性氨基酸引起的兴奋毒性是糖尿 病视网膜病变〔1〕、青光眼、视网膜变性等 疾病的视网膜神经元损伤及死亡的主要机 制之一。体内研究表明，视网膜的兴奋毒性 主要由N甲基D天冬氨酸受体介导〔2〕。牛 磺酸是视网膜含量最丰富的游离氨基酸， 近 年来发现，牛磺酸可以保护培养的小脑颗粒 细胞对抗兴奋毒性损伤〔3〕。本实验通过在 大鼠玻璃体内注射 NMD席IJ备视网膜兴奋毒 性损伤模型，观察牛磺酸对 NMD麻导的视 网膜组织结构及超微结构损伤的保护作用。 1、材料与方法 1、1实验动物及视网膜 NMDA4奋毒性 损伤动物模型的建立成年雄性 SpragueDawley大鼠20只，体质量200? 250g,实验动物质量合格证号：SCXK2002008 大鼠腹腔注射速眠新注射液 01ml/100g麻醉， 5蜓品酰胺散瞳，1嘛U多卡因进行角膜表面 麻醉，用微量注射器从额上方巩膜距角膜缘 外3m说进针，见针尖到达玻璃体中后部后， 缓慢注入5^ l4mmol/L的NMDA2〕。洁霉素 滴眼预防感染。眼瞎大鼠弃去。 1、2实验分组20只大鼠按随机数字表 法分为4组：正常对照组；NMD期；NMDA+ 牛磺酸干预组；磷酸盐缓冲液对照组；每组 5只大鼠。正常对照组不进行任何处理；NMDA 组为上述模型组；牛磺酸干预组于眼内注射 NMDAT 1h及其后每天腹腔注射牛磺酸，共 注射3d; PBS对照组于玻璃体内注射 5(1 l01mol/LPBS。玻璃体注射后第 4d观察 指标变化。NMDA牛磺酸，用无菌01mol/LPBS 稀释。 1、3视网膜组织病理学观察及视网膜厚 度测量腹腔注射2ml/100g03%戊巴比妥钠处 死大鼠，迅速摘取右眼，去除前节、晶状体 及玻璃体，将眼杯用10%鬲尔马林固定，常 规石蜡包埋，经视乳头切片，苏木精伊红染 色，观察视网膜组织结构并照相，LEICAQWIN 图像分析软件于距视乳头中心 15mnft双侧 测量视网膜全层及视见网膜内层厚度， 每只 眼球取6张切片，每组5只大鼠结果求平均 值。 14视网膜超微结构观察按前法处死大 鼠，摘取左眼，将眼杯迅速置于 4C预冷的 3咻二醛固定，常规1%车我酸固定，系列丙 酮脱水，环氧树脂浸透包埋，经光镜定位后 行超薄切片，于TENCAI10PHILIPS透射电镜 下观察视网膜各层细胞的超微结构。 15统计分析采用SPS敬计软件处理， 组间比较用单因素方差分析。 2、结果 2、1视网膜组织病理结构改变及视网膜 厚度测量 表1各组视网膜总厚度及视网膜内层厚 度测量结果 HE染色及视网膜厚度测量结果显示，玻 璃体内注射NMD侣第4d,与未注射眼视网 膜相比，视网膜总厚度变薄，尤以视网膜内 层厚度变薄明显，节细胞数有减少，而视网 膜内、外段及外核层改变不明显。牛磺酸干 预使视网膜总厚度及内网状层厚度较模型 组增厚，节细胞的丢失减少。表明牛磺酸干 预可有效保护NMDA4奋毒性对视网膜组织 病理结构改变。 2、2玻璃体注射NMD段牛磺酸干预对 视网膜超微结构的影响透射电镜观察发现， 玻璃体注射NMD垢第4d,视网膜内核层细 胞及节细胞超微结构发生改变。镜下可见， NMD愿：视细胞胞体无明显病变， 色素上皮 细胞及盘膜正常，内核层神经元线粒体中、 重度肿胀，崎消失甚至空泡样变，内质网严 重扩张，节细胞部分轴突明显肿胀，视神经 纤维明显肿胀甚至解体，整个内核层神经元 及节细胞表现为变性改变。牛磺酸干预组： 内核层细胞有轻度线粒体肿胀及内质网扩 张，节细胞超微结构正常，仅部分节细胞见 轻度线粒体肿胀和内质网扩张， 视神经纤维 层轴突肿胀不明显，牛磺酸组超微结构改变 较NMDA1明显减轻。 3、讨论 目前认为EAA引起的兴奋毒性是糖尿病 视网膜病变、青光眼、视网膜缺氧等的视网 膜神经元死亡的主要机制之一。研究表明 〔2〕，视网膜内层神经元的兴奋毒性损伤主 要由对NMD庚体的过度刺激引起，N