农业部953号公告-1-2007-转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米Bt10及其衍生品种定性PCR方法.pdfVIP

ICS 65．020 B04 中华人民共和国国家标准 农业部953号公告一1—2007 转基因植物及其产品成分检测 抗虫玉米Btl0及其衍生品种 定性PCR方法 Detectionof modified andderived geneticallyplants products PCRmethodforinsect-resistantmaizeBtlOanditsderivates Qualitative 2007—12—18发布 中华人民共和国农业部发布 农业部953号公告一1—2007 刖 嗣 本标准由中华人民共和国农业部科技教育司提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归13。 本标准起草单位：农业部科技发展中心、上海交通大学。 本标准主要起草人：张大兵、刘信、杨立桃、沈平。 本标准为首次发布。 农业部953号公告一1—2007 转基因植物及其产品成分检测 抗虫玉米Btl0及其衍生品种定性PCR方法 1范围 本标准规定了转基因抗虫玉米Btl0转化体特异性定性PCR检测方法。 本标准适用于转基因抗虫玉米Btl0及其衍生品种，以及制品中Btl0的定性PCR检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适合于本标准。 NY／T672转基因植物及其产品检测通用要求 NY／T673转基因植物及其产品检测抽样 NY／T674转基因植物及其产品检测DNA提取和纯化 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3 1 zSSllb基因zSSHb gene II 2的基因。 编码玉米淀粉合酶异构体zSTS 32 ofBtlO sequence Btl0转化体特异性序列event-specific 外源插入片段5’端与玉米基因组的连接区序列，包括外源插入载体氨苄青霉素抗性基因57端序列 和玉米基因组的部分序列。 4原理 根据转基因抗虫玉米Btl0转化体特异性序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依据是否 扩增获得预期130 bp的特异性DNA片段，判断试样中是否含有转基因抗虫玉米Btl0。 5试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水。 51琼脂糖。 5．2 10g／L溴化乙锭溶液：称取1．0g溴化乙锭(EB)，溶于100ml。水中。 注：溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。 5．3 10tool／L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠(NaOH)80．0g，先用160mL水溶解后，再加水定容到200 mL。 5．4 500 mmol／L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8．o)：称取18．6 人70 mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液(5．3)，加热至完全溶解后，冷却至室温，用氢氧化钠溶液(5．3) 1 农业部953号公告一1—2007 mL。