农业部953号公告-3-2007-转基因植物及其产品成分检测耐除草剂油菜T45及其衍生品种定性PCR方法.pdfVIP

ICS 65．020 B04 中华人民共禾口 国国家标准 农业部953号公告一3—2007 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂油菜T45及其衍生品种定性 PCR方法 Detectionof modifiedandderived geneticallyplants products methodforherbicide-tolerantcanolaT45anditsderivates PCR Qualitative 2007-12—18发布 2008—03—01实施 中华人民共和国农业部发布 农业部953号公告一3—2007 刖 罱 本标准由中华人民共和国农业部科技教育司提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部科技发展中心、上海交通大学、上海市农业科学院。 本标准主要起草人：杨立桃、沈平、张大兵、潘爱虎、厉建萌。 本标准为首次发布。 农业部953号公告一3—2007 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂油菜T45及其衍生品种定性PCR方法 1范围 本标准规定了转基因耐除草剂油菜145转化体特异性定性PCR检测方法。 本标准适用于转基因耐除草剂油菜T45及其衍生品种，以及制品中145的定性PCR检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适合于本标准。 NY／T672转基因植物及其产品检测通用要求 673转基因植物及其产品检测抽样 NY／T 674转基因植物及其产品检测DNA提取和纯化 NY／T 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3 1 HMG I／Y基因HMGI／Y gene 编码高移动簇蛋白I／Y的基因。 3．2 of sequenceT45 1鸽‘转化体特异性序列event-specific 35S启动子57端部分序列和油菜基因 外源插入片段5’端与油菜基因组的连接区序列，包括CaMV 组的部分序列。 4原理 根据转基因耐除草剂油菜T45转化体特异性序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依据是 否扩增获得预期233 bp的特异性DNA片段，判断试样中是否含有转基因耐除草剂油菜T45。 5试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水。 5．1琼脂糖。 52 10 g／L溴化乙锭溶液：称取1．0g溴化乙锭(EB)，溶于100mI，水中。 注：溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。 53 g，先用160mL水溶解后，再加水定容到 10mol／L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠(NaOH)80．0 200mL。 5．4 500mmol／L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8．o)：称取18．6g乙二铵四乙酸二钠(EDTA—Na2)，加 入70mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液(5．3)，加热至完全溶解后，冷