hbv基因与耐药检测 临床版.pptVIP

HBV 分型和耐药突变基因检测 产品经理 吴 勇 一、慢性乙肝患者抗病毒治疗的临床现状 二、基因芯片原理、亚能 HBV 分型与耐药突变基因检测 三、 HBV 分型与耐药突变基因检测的运用与临床意义 目 录 一、乙肝患者抗病毒治疗的临床现状 耐药 指南 策略 干扰素： 普通干扰素α（ 2a 、 2b 、 1b ）、 聚乙二醇干扰素α（ 2a 、 2b ） 核苷（酸）类药物： 拉米夫定、阿德福韦酯、 恩替卡韦、替比夫定 药物种 类有限 我国 CHB 治疗现状 2012 年 EASL 、 APASL 乙肝防治指南建议 : ETV 或 TDF 作为单药一线用药 国内难以普及 ： 强调根据情况个体化选药，患者依从性差 国情 差异 干扰素： PegIFN 1 年病毒学应答率 25% ， HBeAg 血 清学转换率 30% ，血清 HBV DNA 阳性率高； 耐药问题 : 核苷（酸）类药物 疗效 有限 慢性乙型肝炎联合抗病毒治疗专家共识，中国肝脏病杂志， 2011 ， 3 （ 2 ）： 38-45 耐药的危害 导致疾病进展（病毒学反弹、生化突破等） 肝硬化和肝癌发生率高 使已取得的疗效（如组织学改善）丧失 后续治疗更复杂、困难，增加医疗成本 耐药毒株的传播可能导致公共卫生问题 警惕 耐药 HBV 耐药 EASL Clinical Practice Guidelines :Management of chronic hepatitis B virus infection. Journal of Hepatology 2012 vol.57|167-185 核苷（酸）类药物耐药 的预防和治疗 2 4 3 3 5 《慢性乙型肝炎防治指南（ 2010 年）》 严格掌握治疗适应症 谨慎选择核苷（酸）类药物 1 高危患者及时联合治疗 治疗中密切监视，一旦耐药尽早救援治疗 尽量避免单药序贯治疗 乙肝实验室检查 HBV DNA 、 基因型和变异检测 HBV 血清学检查 ： HBsAg 、抗 HBs 、 HBeAg 等乙肝两对半 HBV DNA 、 基因型和变异检测 生物化学检查： 血清 ALT 和 AST 、胆红素、白蛋白等 HBV 分型与耐药突变检测方法 ? PCR 产物直接测序法； ? PCR 产物克隆测序法； ? 限制性片段长度多态性技术 (RFLP) ； ? 线性探针反向杂交法 (INNO-LiPA) ； ? 基因芯片技术 ? 限制性片段质谱多肽性分析 ? 焦磷酸测序法 ? 深度测序法 二、基因芯片原理、 亚能 HBV 分型与耐药突变基因检测 基因芯片 (gene chip) ：是多种特定的寡核苷酸序列为 探针 ，固定 于支持物表面上而成的 二维 DNA 阵列 。 基本原理： 利用碱基互补配对原则，通过目的 DNA 与探针特异结合 来判断目的 DNA 的序列信息。 基因芯片原理 乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒 （ PCR- 反向点杂交法） 注册号：国食药监械（准）字 2011 第 3401177 号 专利号： ZL200710073933.3 国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂 PCR 扩增： 在 S 基因和 P 基因重叠区段设计 PCR 引物， PCR 扩增片段 既包含耐药突变位点又能进行基因分型。 P 基因：耐药突变检测 编码 DNA 合成酶（包含逆转录酶 rt ），抗 病毒药物作用靶区，耐药基因突变热点区 S 基因：分型检测 产品技术原理 亚能 HBV 产品应用 抗病毒治疗前、治疗中 HBV 的基因分型和耐药突变基因检测 ? 区分我国常见的 HBV-B 、 C 、 D 基因型 ? 涵盖我国 4 种核苷（酸）抗病毒药物（拉米夫定、阿德福韦酯、 替比夫定、恩替卡韦） 7 个耐药位点的 16 种突变： rtL180M 、 rtM204V/ I 、 rtA181V/T 、 rtN236T 、 rtM250I/L/V 、 rtS202G/ I 、 rtT184 I /S/A/F/L 。 本产品检测的样本为 血清或血浆 ； 要求待检样本的 HBV DNA 载量≥ 1.0 × 10 3 copies/mL 。 样本要求 样本保存 为了避免 DNA 降解，制备好的血清或血浆，避免长时间室温放置； 2 ～ 8 ℃保存不超过 48 小时； -18 ℃以下保存不超过半年，避免反复冻融。 注意事项 全基因序列 测定法 限制性片段长度多态 性分析法（ RFLP ） 实时荧光 PCR 法 亚能 HBV 基因芯片 灵敏度 灵敏度低，最低 检测限为 20% ； 灵敏，最低检测限为 5% ； 灵敏，最低 检测限为 5% ； 灵敏，最低检测限为 5% ； 检测 位点 所有突变位点 已知耐药位点 仅能检测 rt204 位点 我国 4 种核苷类药物 7