2020生化实验血糖的测定.pptVIP

血糖的测定 实验四 血糖及血糖水平的概念： 血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平： 3.9~6.7mmol/L ? 调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质 激素和肾上腺素。 ? 血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病；⑵低血糖 ? 临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾 病的主要依据。 ? 科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在 某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。 测定血糖的意义 体液糖的测定项目： ①血糖浓度测定 ②口服糖耐量试验 ③糖化血红蛋白试验 ④糖化血清白蛋白测定 ⑤胰岛素测定 ⑥ C- 肽测定等 测定 方法 无机化学法： Folin-Wu 法 有机化学法：邻甲苯胺法 酶法：葡萄糖氧化酶法 血糖测定的常用方法 葡萄糖氧化酶 - 过氧化物酶法原理 （ 1 ）葡萄糖＋ O 2 ＋ H 2 O （ 2 ） H 2 O 2 ＋ 4- 氨基安替吡啉＋苯酚 葡萄糖酸＋ H 2 O 2 葡萄糖氧化酶 （ GOD ） H 2 O ＋红色醌式物质 过氧化物酶 （ POD ） Trinder 反应 505nm 光吸收法测定 相对血糖浓度 分光光度计的原理 ? 分光光度技术 ? 电泳技术 ? 层析技术 ? 离心技术 生物化学的四大研究技术 ： ? 光的波粒二象性 ? 物质的光吸收性 ? 分光光度计的原理 分光光度计的工作原理 朗伯 - 比尔定律 朗伯定律 ： A=k 1 L 比尔定律 ： A=k 2 C 朗伯 - 比尔定律 ：如同时考虑液 层厚度和溶液浓度对吸光度的 影响，则吸光度与溶质的浓度 和溶液的厚度的乘积成正比。 A=KLC 朗伯 - 比尔定律应用 A 标 =KC 标 L A 样 =KC 样 L 标准品法测定未知样品含量 C 样 = A 样 A 标 × C 标 1. 接通电源， 调整波长 。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中 ，注意：加入样品量不超过比色杯体积的 2/3 。 3. 调模式为“透射比”， 对空白对照进行调“ 0 ” （开盖 ）和调“ 100 ” （闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”， 将空白对照调“ 0 ” ，测定待测 样品的吸光度值。 分光光度计的使用 葡萄糖氧化酶 - 过氧化物酶法检测激 素对血糖浓度的影响 方 法 （ 1 ） 取 4 支试管，按下表加入试剂 : 试剂 标准管 (ml) 测定管 1(ml) 测定管 2(ml) 空白管 (ml) 血清样品 – 0.02 0.02 – 葡萄糖标准液 0.02 – – – 蒸馏水 – – – 0.02 酶酚混合试剂 3.00 3.00 3.00 3.00 实验步骤： 充分混匀， 37 ℃ 水浴中保温 20min ； 冷却至室温后 ， 505nm 处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。 （ 2 ） 计算 ： 依据 朗伯 - 比尔定律 ： A= KL C 标准管葡萄糖浓度： 5mmol/L 测定管葡萄糖含量 （ mmol/L ） ＝ 测定管光密度 标准管光密度 × 5 ? 正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液 应占比色皿的 2/3 。 ? 血糖测定应在取血后 2 小时内完成，放置太久，血 糖易分解，故使含量降低。 ? 酶酚混合液一般现用现配。 注意事项 补充实验 ? 测 2-3 名同学早餐后和空腹血糖的 水平，并比较二者之间的区别。 ? 使用怡成 JPS-5 型血糖仪。 小结 1 、葡萄糖氧化酶 - 过氧化物酶比色法 测定血糖的原理。 2 、分光光度计的正确使用。 3 、实验操作中存在的问题。