食品微生物检验技术 菌种分离与纯化 微生物的分离纯化.pptVIP

院系：食品工程学院 主讲人：赵红丽 微生物的分离纯化 鹤壁职业技术学院 目录/Contents 01 菌种分离与纯化技术简介 物理消毒灭菌法 稀释涂布平板法 02 03 平板划线分离法 菌种分离与纯化技术简介 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化,微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落,通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。 01 菌种分离与纯化技术简介 贴标签：打开平皿包扎纸，在平皿上盖边缘贴好标签纸或者用记号笔注明菌种、接种时间、操作者等信息。 1 1 b c d a 制备平板 倒平皿：左手持平皿，开口位置过火，右手持三角瓶，向平皿内倾注15-20mL培养基。 取三角瓶：在酒精灯无菌区用右手将棉塞拧松，用右手手掌和小拇指拔取棉塞，右手持三角瓶，瓶口保持在酒精灯火焰旁。 凝固：倒好的平皿轻轻晃动一下，置于水平操作台上凝固，凝固中不能移动。 02 稀释涂布平板法 取6支盛有9mL无菌水的试管排列于试管架上，依次标上10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6字样。以1ml无菌吸管按无菌操作从样品管中吸取1mL菌液于10-1试管中，然后用另一吸管在10-1试管中来回吹吸三次，使其混合均匀，制成10-1稀释液。再用此吸管从10-1管中吸取1mL稀释液注入10-2管中，依次制成10-2，10-3，10-4，10-5，10-6稀释液。 梯度稀释 02 稀释涂布平板法 接种：用一支1mL无菌吸管从高稀释度开始分别吸取各个低度稀释液0.1mL至相应的无菌平皿内。 1 1 b c d a 接种涂布 涂布：左手少许打开皿盖，用涂布棒把培养基上的菌悬液均匀涂布开。将涂抹好的平板放于操作台上20-30min，使菌液渗入培养基内。 烧涂布棒：右手拿涂布棒，在酒精灯上灼烧并冷却。 涂布棒灭菌：灼烧涂布棒灭菌。 02 稀释涂布平板法 培养 b.清理台面： 整理试验台面，实验器具灭菌、清洗归位。 a.培养：将接种好的平皿按照微生物最佳培养温度倒置放于恒温培养箱中进行培养。 02 稀释涂布平板法 挑取单菌落 02 稀释涂布平板法 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述3种 培养基斜面上,分别置于28℃和37℃温室培养。若发现有杂菌， 需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。 贴标签：打开平皿包扎纸，在平皿上盖边缘贴好标签纸或者用记号笔注明菌种、接种时间、操作者等信息。 1 1 b c d a 制备平板 倒平皿：左手持平皿，开口位置过火，右手持三角瓶，向平皿内倾注15-20mL培养基。 取三角瓶：在酒精灯无菌区用右手将棉塞拧松，用右手手掌和小拇指拔取棉塞，右手持三角瓶，瓶口保持在酒精灯火焰旁。 凝固：倒好的平皿轻轻晃动一下，置于水平操作台上凝固，凝固中不能移动。 02 平板划线分离法 取菌：用右手的小指和手掌取下管塞，试管口缓缓过火灭菌2-3次，接种环伸入试管，先使环接触管内壁，冷却。将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。将试管口通过火焰，并塞上棉塞。 c b 接种环灭菌：右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复灼烧2-3次。 a 准备菌悬液：将菌悬液试管摇匀，拧松试管棉塞。 平板划线 03 平板划线分离法 e 接种环灭菌：在酒精灯火焰上再次灼烧接种环灭菌。 d 平板划线：左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌液的接种环迅速伸入平板内，进行连续或分区划线，盖上皿盖。 平板划线 03 平板划线分离法 图4-15平板划线法示意图 培养 b.清理台面： 整理试验台面，实验器具灭菌、清洗归位。 a.培养：将接种好的平皿按照微生物最佳培养温度倒置放于电热恒温培养箱中进行培养。 03 平板划线分离法 挑取单菌落 03 平板划线分离法 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述3种 培养基斜面上,分别置于28℃和37℃温室培养。若发现有杂菌， 需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。 感谢您的聆听 THANK YOU FOR LISTENING 鹤壁职业技术学院 主讲人：赵红丽 * * * * *