中药制剂检测技术 项目6 中药制剂的含量测定技术 第6章项目3高效液相色谱法.pptxVIP

项目三 高效液相色谱法; 1. 定义 高效液相色谱法是采用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离并测定含量的方法。 2. 特点 分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（供试品不需气化，只需制成溶液即可）、流动相选择性大、流出组分易收集、色谱柱可反复使用等特点 。 3. 范围 挥发性低、热稳定性差、分子量大、离子型化合物 。; 一、仪器工作原理 （一）仪器的构造;项目三 高效液相色谱法;高效液相 色谱仪外观;项目三 高效液相色谱法;项目三 高效液相色谱法;项目三 高效液相色谱法;项目三 高效液相色谱法;六通阀进样器外观;项目三 高效液相色谱法; 3.色谱分离系统 色谱分离系统由保护柱、色谱柱、恒温装置和连接阀等组成。 （1）保护柱：具有防止供试品和进样阀垫圈中的固体颗粒的进入分析柱作用。 （2）色谱柱：色谱柱是高效液相色谱仪的重要部件，由柱管、接头和过滤片组成。 ;项目三 高效液相色谱法; 柱管、接头、过滤片; （4）恒温装置：恒温装置(恒温箱)精确控制色谱柱温度的装置，具有调节温度的功能。 （5）色谱柱柱效的评价： 硅胶柱、反相色谱法的色谱柱（ODS柱等）、正相色谱法的色谱柱（氰基或氨基柱） 测各组分的W1/2及tR，计算理论塔板数n及相邻组分的分离度R（≥1.5）; 4.检测系统 高效液相色谱检测器通常分为两类：通用性检测器和选择性检测器。 （1）通用性检测器：蒸发光散射检测器、示差折光检测器。 （2）选择性检测器：可见-紫外检测器、二极管陈列检测器、荧光检测器、电化学检测器及质谱检测器。;紫外检测器（Utraviolet detector，UV）：紫外检测器是高效液相色谱法中使用最广范的选择性检测器。分为固定波长、可变波长和二极管阵列检测器三种类型。 ①固定波长检测器；②可变波长检测器；③二极管阵列检测器（Diode array detector）。; 5.数据记录与处理系统 是将色谱系统的检测信号进行记录和处理成分析结果的装置。 6.仪器性能 衡量仪器性能的指标包括仪器的重复性、噪音、基线漂??、敏感度、线性、波长精度等。; 典型的高效液相色谱仪流程如图所示 ;1.用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。 2.打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml，设置高流速（如9ml/min）或用冲洗键（PURGE）进行泵排气，出口处流动相连续液流后，将流速逐步回零或停止冲洗，关闭排放阀。;1.开启检测器电源开关，选择光源（钨灯或氘灯），选定检测波长，待稳定后，测试参比和供试品光路的信号应符合要求，设置吸收度方式和检测响应时间（一般不大于1秒），设置满刻度吸收值（适用于记录仪）。 2.开启色谱处理机，设定处理方法，初步设定衰减、纸速、记录时间、最小峰面积等参数，或设定记录仪的纸速或衰减。; 1.六通阀式进样器 （1）进样手柄置采样位置（LOAD）。 （2）用供试品溶液清洗配套的注射器，再抽取适量，如用定量环（LOOP）载样，则注射器抽取量应不少于定量环容积的5倍，用微量注射器定容进样时，进样量不得多于环容积的50%。在排除气泡后方能向进样器中注入供试品溶液。 （3）把注射器的平头针直插至进样器底部，注入供试品溶液，除另有规定外，注射器不应取下。 （4）将手柄转至进样位置（INJECT），供试品被流动相带入色谱柱。; 2. 自动进样器：自动进样装置有圆盘式自动进样器、链式自动进样器、坐标式自动进样器等。 （1）将供试品溶液用0.45μm滤膜滤过，取续滤液至进样瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针方向旋紧。为避免堵塞进样器及损伤进样器，一般应选择与自动进样器型号相配套的进样瓶。 （2）将进样瓶依次放入贮样室内，记录瓶位置号（VIAL）。如果自动进样器有控温装置，设置温度参数。 （3）对自动进样器进行校正，使自动进样器为默认位置、进样针冲洗系统正常、管内无气泡、有足够的冲洗液和流动相。 （4）设定自动进样参数。即设定供试品溶液自动进样的起始位置、进样体积、稀释倍数、数据文件名等，用START进样。;1. 注样同时启动数据处理机，采集和处理色谱信息，如系记录仪，则注样同时按下记号键作起始记号。 2. 最后一峰出完后应继续走一段基线，确认无组分流出后结束记录。 3. 根据第一张预试