原核表达（七天速成）与常用软件.pptVIP

下载本文档

2
0
约小于1千字
约 50页
2020-12-09 发布于广东
举报
版权申诉

原核表达（七天速成）与常用软件.ppt

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

;;↓;;↓;;;6.引物自身及引物之间不应存在互补序列 7.引物5′ 端和中间△G值应该相对较高，而3′ 端△G值较低 8.引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰 9.扩增产物的单链不能形成二级结构 10.引物应具有特异性 ;;;; 登录NCBI：http:/// ;共１１６４ｂｐ，按照把各位数字相加，除以３得整数，即可认为这一序列能编码完整的氨基酸序列;将基因序列复制粘贴到软件内并保存;;;;;;;下拉滚动条，下一方块中的数值要求同上;;;引物信息保存方式;;;2.胶回收酶切产物，测浓度。 3.连接酶切后目的片段和质粒，16℃过夜。;;3.阳性菌提重组质粒（试剂盒），测序和双酶切鉴定，完全正确后冻存。 4.将重组质粒转化到BL21。 5.挑单菌落于EP管，PCR鉴定，阳性者接菌于试管扩大培养。 6.阳性菌提重组质粒，双酶切鉴定，正确后冻存。;;7.上清倒入干净的50ml离心管中，2mlPBS重悬包涵体。 8. 16ul上清+4ul的5xSDS loading buffer 16ul包涵体+4ul的5xSDS loading buffer 9.煮沸10min,跑蛋白胶确定表达蛋白是在上清还是在包涵体。;;8.用5ml的蒸馏水过柱。 9.用5ml的包涵体溶解buffer 1ml/min过柱。 10.将滤好的蛋白液过柱（尽量慢），收集滤出液。 11.用10ml的包涵体溶解buffer 1ml/min过柱，收集滤出液。 12.用5ml包涵体洗脱buffer洗柱，收集滤出液。（标号，每管1ml） 13.用10ml的包涵体溶解buffer 1ml/min过柱。 14.用5ml20%乙醇过柱。 ;;8.用5ml上清洗脱buffer洗柱，收集滤出液。（标号，每管1ml） 9.用10ml的上清溶解buffer 1ml/min过柱。 10.用5ml20%乙醇过柱。所有过柱液体都要用0.22um滤器过滤。所有过柱蛋白都要用0.45um滤器过滤。;Thanks