双抗体夹心法测可溶性抗原.pptVIP

ELISA双体夹心法检测扰愿 王春 复旦大学免疫学系 复旦大学免疫生物学研究所 细胞与分子免疫学技术 联免疫吸附宴验 (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay, ELISA) 种固相酶免疫测定技术,利用酶标记的抗原或者 抗体,在固相载体上定量或定性测定特异性抗体、可溶 性抗原及细胞表面抗原。 1971年由瑞典学者 Engraft和 Perlmann,荷兰学者 wieman和 Schuurs报道; 开创了运用酶标记免疫技术进行液体标本中微量物 质测定的实验方法; 基本原 」 ELISA_撬原(Ag)或撬体(Ab)三要素 日抗原或抗体的相化:已知的Ag/Ab结合到固相载体 表面,并保持其免疫活性; 口抗原或抗体的酶标记:酶标Ag/Ab,并保持其免疫活性 和酶活性; 口底物显色:底物被酶催化成为有色产物定性和定量 放大免疫反应的信号 基本特点 高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性 高灵敏度:酶催化底物显色的高效性, pg水平微量检测 定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值 基本类型 抗体测定法 间接法检测特异性抗体 °抗原测定法 〉直接竞争法检测可溶性抗原 双抗体夹心法检测可溶性抗原 (改良双抗体夹心法检测可溶性抗原) 应用生物素-亲和素双抗体夹心 ELISA法 间接法检测特异性抗体 包被已知抗原 与待测抗体孵育 洗涤 待测抗体洗涤 洗涤 底物 +substrate 与酶标抗体孵育 加入底物 显色 优点 1.只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测」 相应抗体的方法 2.操作简单迅捷 缺点: 可重复性差 通常用于抗体效价的检测和某些疾病的早期诊断 直接竟争法检测可溶性抗原 A组 ◆4●:9 009990 抗原与酶标抗原混合物 信号弱 包被特异性抗体 丫铜解争9 信号强 原理:待检抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合;待检抗原含 量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅