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双向琼脂扩散试验 授课对象:临床医学专业八年制本科 授课教员:汤玉瑜 授课单位:第三军医大学基础部免疫学教研室 实验目的掌握双向琼脂扩散试验的原理 理解琼脂的制备方法 了解双向琼脂扩散实验的应用 教学重点琼脂的制备方法 双向琼脂扩散实验的原理 教学难点如何根据沉淀线判断抗原或抗体的浓度 使用教材 《免疫学实验》第一版朱道银吴玉章科学出版社2008 参考书 《免疫学》第四版龚非力科学岀版社2007 《 Med ical I mmuno logy》10th,T.G. Pars low 推荐网站 医学免疫学网络教学1/mta/ 美国国立生物技术信息中心 中国生物信息网 概述 临床免疫检验技术的出现最早可追溯至19世纪末。1896年 wida发现在伤寒杆菌中加入伤寒病菌人的血清可致伤寒 杄菌发生特异的凝集现象,利用这种凝集现象可有效的诊 断伤寒病,这就是最早用于病原体感染诊断的免疫凝集试 验,亦即著名的肥达试验( Widal test) 直擬凝集反应 x人Q 门凝集反应 毂倬颗粒可性阬原 间接凝集抑制反应 囉集反应 常见的免疫检验技术: 经典的免疫学反应 口凝集反应 口沉淀反应 口补体结合反应 口中和反应 免疫电泳技术 ■免疫标记技术 口免疫荧光 口免疫酶技术 口放射免疫测定 抗原抗体反应( antigen- antibody reaction)是抗原与 相应抗体之间所发生的特异性结合反应。它既可发生在体 内,也可发生在体外。 体外的抗原抗体反应表现为沉淀、凝集、细胞溶解、 补体结合、中和反应等反应现象 兰德施泰纳,1868年-1943年,普林斯顿洛克 菲勒医学研究所,发现人的主要血型系统而获 1930年诺贝尔生理学或医学奖。他最初研究 化学,1896年後对血清学和免疫学产生兴趣,将 化学方法引入血清学研究,发现不同人的血清与 血细胞混合後可发生凝集反应,1901年用抗A血 清和抗B血清将血液分成A、B、C(後称O)三型 ■沉淀反应( precipitation)是可溶性抗原与相应抗体在电 解质存在的条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。 可溶性抗原 相应抗体 沉淀线或沉淀环 ■影响沉淀反应的主要因素 1.抗原、抗体反应的浓度、比例 2.电解质 3.温度 4.酸碱度 分类 对流免疫电泳 环状沉淀反应 沉淀反 双向扩散 琼脂扩散试验 单向扩散 电泳技术 絮状沉淀反应 火箭免疫电泳 Question: 怎样才能在无特殊仪器设备而又操作简便 的定性检测血清中各种免疫球蛋直、甲胎 蛋白、乙肝表面抗原等? 实验原理 可溶性抗原与相应抗体在含适量电解质的琼脂糖凝胶板 的对应孔中各自向四周自由扩若两者分子比例适当,则 在扩散的一定时间后在两孔之间相遇并生成白色沉淀线 Antibo Antigen ● °2 Agar matrix Precipitate