微生物学检验 细菌检验技术 04 第四章 细菌检验技术.pptx

第四章细菌检验技术目录细菌形态检验细菌接种与培养技术细菌生化鉴定技术细菌的非培养检测技术细菌检验自动化技术PART 01细菌形态检验细菌的显微镜检查显微镜：光学显微镜所用放大倍数：10×100＝1000所用镜头：油镜头镜油：香柏油或石蜡油香柏油折光率（n＝1.515）与玻片折光率（n＝1.52）接近显微镜使用完毕须擦拭镜头。一、染色标本的检查1、染色方法的种类单染法:采用一种染料染色复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。2、染色标本检查的基本程序涂片－→干燥－→固定－→染色 涂片方式干燥的方法固定的方法、目的染料种类：碱性染料、酸性染料、中性染料，碱性染料最常用1×１cm １×１cm 生理盐水生理盐水涂片方式　＋葡萄球菌　＋大肠埃稀菌3、复染法基本程序初染－→媒染－→脱色－→复染4、革兰染色法（Gram染色）（1）染液组成： 结晶紫染液、卢戈碘液、95％乙醇、稀释复红（2）染色方法：1分钟1分钟30S～1min结晶紫 初染卢戈碘液 媒染95％乙醇 脱色稀释复红 复染影响革兰染色的关键步骤是脱色（3）革兰染色结果紫色－－革兰阳性菌红色－－革兰阴性菌革兰阳性革兰阴性（4）染色原理渗透学说：与肽聚糖结构有关化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关等电点学说：与细菌所带电荷有关（5）革兰染色意义有助于鉴别细菌有助于选择用药有助于了解细菌的致病性（6）影响革兰染色的因素操作因素 涂片的厚薄 脱色时间的长短染液因素 卢戈碘液放置时间过长 95％乙醇挥发 结晶紫与草酸铵混合时间太长细菌因素 细菌种类、 细菌菌龄抗酸染色用于区别抗酸菌与非抗酸菌5、萋-尼抗酸染色法染色液：5%苯酚复红、3%盐酸酒精、吕氏亚甲蓝方法： 5%苯酚复红加温染色5min 3%盐酸酒精 脱色 碱性美蓝复染结果： 红色 阳性；蓝色 阴性。临床意义：诊断结核病患者。（1）抗酸染色结核分支杆菌（2）特殊染色荚膜（2）特殊染色芽胞（3）细菌特殊染色伤寒杆菌的鞭毛白喉杆菌（阿勃特染色）特殊染色异染颗粒（4）负染色法二、不染色标本检查应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法盖玻片细菌悬液载玻片压滴法悬滴法镜检PART 02细菌接种与培养技术细菌实验室 进行细菌学实验的场所，标本的接种、培养、分离、鉴定、药敏等工作在此完成。 细菌室要防止外界污染，还要避免细菌播散。 配备紫外灯、消毒剂等。注意定期消毒。 对无菌物品和标本应明显分开放于指定位置，同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。 保证细菌室的温度。无菌实验室是细菌实验室内用于无菌操作的小室，要求更严格。 完全封闭，应有缓冲区。 用前要用紫外灯消毒30min,定期用甲醛熏蒸消毒。 仅限于分装培养基及传染性强的细菌接种。 要保证本室的无菌状态。 保证本室的温度。 无菌实验室可用超净工作台代替。一、基本条件(一)接种针和接种环：微生物检验中用于取菌、接种、分离细菌的器具。由三部分组组成，即环（针，镍合金）、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过火灭，执笔法使用。接种针用于穿刺接种细菌，接种环用于固体、液体培养基的细菌种。L型玻璃棒：用于琼脂平板涂布接种细菌。1. 接种工具2.接种环境0103接种罩无菌台02超净工作台一、基本条件（二）培养皿 制备固体培养基常用的器皿，用于细菌的分离培养。 规格：50㎜*10 ㎜ ；75 ㎜ * 10 ㎜； 90 ㎜ * 10 ㎜ 材质：玻璃或塑料一、基本条件（三）培养箱 电热恒温箱：（隔水式、气套式） 二氧化碳培养箱 厌氧培养箱 二氧化碳培养法 CO2培养箱法 烛缸法 化学法 厌氧培养法 厌氧培养箱法 厌氧罐法一、培养基培养基(culture media)：是指用人工方法，将细菌等微生物生长繁殖所需要的营养物质按比例混合，调节pH值，高压灭菌而成的营养基质。1、培养基的主要成分及其作用（1）营养物质 蛋白胨：提供氮源,合成菌体蛋白和酶。 肉浸液：提供碳源和氮源（少）。 牛肉膏： 糖和醇类：提供能量和碳源，可供鉴别细菌用。 血液：提供生长因子，测定细菌的溶血特性。 鸡蛋与血清：制备特殊的培养基。 无机盐类：提供各种元素。 生长因子：提供自身不能合成的生长因子。（2）水分：不含杂质的蒸馏水和离子交换水。（3）凝固物质：1、琼脂 2、明胶（4）指示剂：用于细菌快速培养和鉴定（5）抑制剂：抑制非目的菌生长（2）按培养基的物理性状分类： 1）液体培养基（infusion media） 用于增菌培养，观察细菌生长现象。 2）半固体培养基（semi－solid media） 加入0.2％－0.5％的琼脂。观察细菌的动力，保存菌种。 3）固体培养基（solid