苎麻根对米非司酮所致大鼠流产模型的保胎作用研究.pdfVIP

摘 要 流产是指妊娠28 周前胎儿重量小于1000 g 而终止者。其中，自然流产是指 由自然因素导致的流产，先兆流产是自然流产发展的第一阶段。近年来，随着国 家“二孩”政策的开放、辅助生殖技术的开展、社会压力的增加以及生活习惯的改 变，自然流产形势日益严峻。因此，如何改善妊娠结局仍然是目前研究自然流产 的重点。本研究通过中药药理学的方法来探究不同剂量苎麻根水煎液对米非司酮 所致大鼠流产模型的保胎效果，并从生殖免疫学角度探究苎麻根对 Th1/Th2/Th17/Treg 平衡的调节作用。 研究首先将性成熟的 SD （Sprague-Dawley ）大鼠雌雄合笼交配建立孕鼠模 型，将孕鼠分为正常组，模型组，给药组（苎麻根低、中、高剂量组）以及黄体 酮组，从妊娠第 1 天（1 d）起，给药组和黄体酮组分别给予相应药物，正常组 和模型组分别给予等量生理盐水。妊娠 10 d 除了正常组孕鼠灌胃生理盐水外， 其余5 组分别灌胃米非司酮3.75mg/kg 以建立流产模型，妊娠16 d 处死孕鼠，获 取血液和胎盘等材料。1．统计各组孕鼠的着床数、活胎数、保胎率以及子宫连 胎重；2 ．使用酶联免疫吸附测定法（ELISA ）检测孕鼠血清及胎盘组织中P 、β-HCG 、 Th1- （IFN-γ ）、Th2- （IL-4 ）、Th17- （IL-17A）及Treg- （TGF-β1 ）水平；3 ．通 过Western Blot 和RT-PCR 实验检测孕鼠外周血和胎盘中转录因子Th1-（T-bet ）、 Th2- （GATA-3 ）、Th17- （ROR-γt ）及 Treg- （Foxp3 ）的蛋白及基因水平。研究 结果如下： 1. 各组孕鼠着床数基本一致，与模型组相比，苎麻根中剂量组孕鼠保胎率 和子宫连胎重显著增加； 2. 与模型组相比，苎麻根中剂量组孕鼠血清中激素孕酮（P ）和人绒毛膜促 性腺激素（hCG ））水平显著增加，外周血Th2 和Treg 型细胞相关的细胞因子和 转录因子基因水平显著增加，而Th1 和Th17 型细胞相关的细胞因子和转录因子 I 基因水平显著减少； 3. 苎麻根中剂量组中，与流产胎盘组织相比，正常胎盘组织不仅表现出形 态上的改变，还表现出P 及β-HCG 水平显著增加，Th2 和Treg 型细胞相关的细 胞因子水平、转录因子蛋白及其基因水平显著增加，而Th1 和Th17 型细胞相关 的细胞因子、转录因子蛋白及其基因水平显著减少； 综上，本研究结果表明：1. 各剂量组苎麻根水煎液基本不影响SD 孕鼠的着 床，苎麻根中剂量组有显著的保胎效果，其可能通过提高孕鼠血清和胎盘中 P 和β-HCG 水平来调节流产孕鼠外周血和胎盘组织中的Th1/Th2/Th17/Treg 平衡而 发挥保胎作用。 接着通过中药网络药理学来预测苎麻根保胎的药效物质基础，保胎相关靶点 以及保胎所涉及的信号通路，进一步理解苎麻根的保胎作用，并为深入研究苎麻 根保胎作用机制提供一定的实验参考数据。 研究首先利用TCMSP 及化学专业数据库等收集苎麻根的化学成分，并根据 药代动力学参数筛选出苎麻根候选活性成分，然后进行苎麻根潜在蛋白靶点的预 测；同时利用DiGSeE 等搜索已报道的与自然流产相关的基因，将苎麻根相关基 因靶点与流产相关基因靶点进行匹配，得到苎麻根活性成分治疗自然流产的潜在 靶点，并对这些靶点进行通路的富集与分析，最后对苎麻根治疗自然流产的活性 成分-蛋白靶点-信号通路网络进行可视化。结果如下： 1. 研究共筛选到苎麻根治疗自然流产的活性成分5 种，分别为：槲皮素、（+ ） -儿茶素、丁子香萜、β-谷甾醇和常春藤甙； 2. 苎麻根治疗自然流产的潜在靶点 18 个，其中槲皮素有 16 个保胎潜在靶 点； 3. 苎麻根保胎所涉及的信号通路主要有 7 条，分别是糖尿病并发症中的 AGE-RAGE 信号通路、疟疾、用于IgA 生成的肠道免疫网络、HIF-1 信号通路、 同种异体移植物排斥、补体和凝血级联以及NF-κB 信号通路。 以上结果表明：槲皮素在苎麻根保胎中具有重要作用，但并非此单一成分单 独发挥保胎作用；苎麻根治疗流产主要是通过免疫、凝血、凋亡，神经系统调控 几个方面进行的。