XM--4菌株的鉴定及其农用与环境修复功能分析.pdfVIP

摘 要 本研究以土壤中筛选的一株细菌 XM-4 为研究对象，对该菌株进行菌种鉴 定、以及农用和环境修复功能分析，将为开发有利于农业发展和环境修复的微 生物菌剂奠定基础。 1. 通过形态学观察和16S rRNA 测序相结合的方法鉴定出菌株XM-4 为枯草 芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）。 2. 通过平板对峙实验证明菌株 XM-4 能有效的抑制禾谷镰刀菌 （Fusarium graminearum ）、串珠镰刀菌 （Fusarium moniliforme ）、玉米弯孢菌 （Curvularia lunata ）、黄瓜枯萎菌 （Fusarium oxysporum ）、茶叶轮斑菌 （Pestalotiopsis theae ）、瓜炭疽菌 （Colletotrichum lagenarium）6 种病原真菌菌 丝的生长，且抑菌率均在60 % 以上。提取菌株XM-4 稳定期的发酵液，经过滤 除菌和 121 ℃高温处理两种方式处理得到无菌发酵液。实验证明两种处理得到 的无菌发酵液对 6 种病原真菌都具有拮抗作用，且抑菌效果基本相同。通过平 板实验测得菌株 XM-4 的解纤维素透明圈和菌落的直径比值最大为 3.6 。通过 CMCase 法和FPase 法定量分析得知菌株XM-4 无菌发酵液的纤维素酶活性在第 3 d 达到最高值分别为203.74 U/mL 和 172.66 U/mL。采用DPPH 自由基清除法 定量测得菌株XM-4 第4 天的发酵液对DPPH 自由基的清除率高达80 % 以上。 同时平板定性实验也验证了菌株XM-4 具有解钾和固氮的功能。 3. 将菌株XM-4 分别接种到含不同浓度双酚S 的固体LB 培养基上，结果显 示：菌株XM-4 对双酚S 的最大耐受浓度为500 mg/L。采用高效液相色谱法检 测不同浓度双酚 S 标准液对应的峰面积，将数据拟合得到双酚 S 标准曲线的回 2 归方程为y=63.608x-48.846 ，R =0.9996 。再将菌株XM-4 接种到双酚 S 含量为 60 mg/L 的无机盐液体培养基中恒温摇瓶培养。用高效液相色谱仪检测菌株 XM-4 连续6 天对双酚S 的降解率。结果显示，菌株XM-4 第6 天对双酚S 的降 解率最高为80.82%。 I 4. 对正常培养的XM-4 菌株和加入双酚S 培养的XM-4 菌株分别进行代谢组 学检测和分析。对12 个实验样本进行分析，共鉴定出10 大类，325 种代谢物， 通过单变量统计分析得知差异代谢物有47 种；再对差异代谢物进行代谢通路分 析筛选出了8 条关键的代谢通路，并最终找出D-精氨酸和D-鸟氨酸代谢通路是 与菌株XM-4 代谢物差异相关性最高的关键通路。 本研究证明了菌株 XM-4 是一株同时兼具农用和环境修复功能的菌株，该 菌株将为生物菌肥的研制和环境修复制剂的开发奠定基础。 关键词：枯草芽孢杆菌；农用功能；双酚S；代谢组学 Ⅱ 目 录 摘 要 I ABSTRACT III 目 录 V 第1 章 引 言1 1.1 研究目的和意义 1 1.2 枯草芽孢杆菌的研究进展 1 1.2.1 枯草芽孢杆菌概述 1 1.2.2 枯草芽孢杆菌农用功能研究 2 1.2.3 枯草芽孢杆菌环境修复功能研究 3 1.3 双酚S4 1.3.1 双酚S 概述 4 1.3.2 双酚S 的毒性研究4 1.3.3 双酚S 的处理方法5 1.4 代谢组学研究 6 1.4.1 代谢组学概述 6 1.4.2 微生物代谢组学的应用 6 1.5 研究的内容和技术路线 7 1.5.1 研究的内容 7 1.5.2 技术路线 8 第2 章 菌株XM-4 的鉴定9 2.1 实验材料9 2.1.1 供试菌株 9 V 2.1.2 主要仪器及设备 9 2.1.3 主要试剂 9 2.1.4 培养基 10 2.2 实验方法10 2.2.1 菌株XM-4 的形态学分析10 2.