考点一基因综合项目工程的概念及操作工具.docVIP

考点一　基因工程概念及操作工具(5年13考) (天津、福建、重庆、浙江、江苏；新课标、天津、北京、山东、江苏、海南；全国纲领卷、广东……) 一、基因工程概念 基因工程别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 原理 基因重组 基础过程 剪切→拼接→导入→表示 结果 人类需要基因产物或生物类型 供体 提供目标基因 受体 表示目标基因 本质 目标基因在受体体内表示 优点 可定向改造生物遗传性状 二、DNA重组技术基础工具 1．限制性核酸内切酶(简称：限制酶) eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(起源：关键从原核生物中分离,作用：割断两个核苷酸之间磷酸二酯键,作用特点：专一性，即限制酶可识别特定核苷酸序列,结果\b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(错位切：产生两个相同黏性末端,,平切：形成平末端)))) 2．DNA连接酶 常见类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 起源 大肠杆菌 T4噬菌体 功效 连接黏性末端 连接黏性末端或平末端 结果 全部缝合磷酸二酯键，图 3.载体 (1)种类：质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。 (2)质粒特点eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(能自我复制,有一个至多个限制酶切割位点,有特殊标识基因)) 1．下图为限制酶和DNA连接酶关系，据图回复： (1)限制酶和DNA连接酶作用部位相同吗？相同。 (2)DNA连接酶起作用时是否需要模板？不需要。 2．探究载体所具条件意义 条　件 意　义 稳定并能自我复制 目标基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制酶切割位点 可携带多个或多个外源基因 含有特殊标识基因 便于重组DNA判定和选择 基因工程操作工具综合考查 eq \x(导学(经典高考题)依据基因工程相关知识，回复下列问题： (1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生片段，其末端类型有________和________。 (2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生片段以下： AATT C……G G……CTTAA 为使运载体和目标基因相连，含有目标基因DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一个限制性核酸内切酶切割，该酶必需含有特点是______________________________。 (3)按其起源不一样，基因工程中所使用DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。 (4)反转录作用模板是________，产物是_____________________________________。 若要在体外取得大量反转录产物，常采取________技术。 (5)基因工程中除质粒外，________和________也可作为运载体。 (6)若用重组质粒转化大肠杆菌，通常情况下，不能直接用未处理大肠杆菌作为受体细胞，原因是____________________________________________________________________。 1．限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶等相关酶分析比较 名称 作用部位 作用底物 作用结果 限制酶 磷酸二酯键 DNA 将DNA切成两个片段 DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA片段 将两个DNA片段连接为一个DNA分子 DNA聚合酶 磷酸二酯键 脱氧核苷酸 DNA DNA酶 磷酸二酯键 DNA 将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸 解旋酶 碱基对之间氢键 DNA 将双链DNA分子局部分解为两条长链 RNA聚合酶 磷酸二酯键 核糖核苷酸 将单个核糖核苷酸依次连接到单链末端 2.限制酶选择注意事项 (1)依据目标基因两端限制酶切点确定限制酶种类 ①应选择切点在目标基因两端限制酶，图甲可选择PstⅠ。 ②不能选择切点在目标基因内部限制酶，图甲不能选择SmaⅠ。 ③为避免目标基因和质粒本身环化和随意连接，也可使用不一样限制酶切割目标基因和质粒，图甲也可选择用Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶切点)。 (2)依据质粒特点确定限制酶种类 ①所选限制酶要和切割目标基因限制酶相一致，以确保含有相同黏性末端。 ②质粒作为载体必需含有标识基因等，所以所选择限制酶尽可能不要破坏这些结构，图乙中限制酶Sma Ⅰ会破坏标识基因；假如所选酶切点不是一个，则切割重组后可能丢失一些片段，若丢失片段含复制起点区，则切割重组后片段进入受体细胞后不能自主复制。 1.eq \x(导学号导学图为DNA分子在不一样酶作用下所发生改变，图中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用正确次序是(　　) A．①②③④　　　　　 B．①②④③ C．①④②③ D．①