合成多肽药物药学研究应用关键技术指导原则.docVIP

附件三 【 H 】 G P H 11 - 1 指导标准编号： 合成多肽药品药学研究技术指导标准 合成多肽药品药学研究技术指导标准 一、序言 多肽类化合物是一类关键生物活性分子。20世纪70年代生物技术在生命科学领域应用，使多肽等生物技术药品研究进展快速；和此同时，伴随多肽固相合成技术及高效液相色谱（HPLC）纯化、分析技术等发展，合成多肽药品开发也成为药品研究中一个活跃领域。 采取化学合成方法制备多肽，能够对天然多肽结构进行修饰，从而增加多肽和受体亲和力、选择性，增强对酶降解抵御力或改善药代动力学特征，甚至由受体激动剂变为拮抗剂；另外，新技术发展，比如以多肽固相合成和组合化学为基础组合肽库合成技术，使得在短时间内取得大量多肽化合物成为可能，药品筛选效率不停提升。所以，将会有越来越多采取化学合成方法制备多肽类化合物成为诊疗用药品。 合成多肽药品是指采取化学合成方法制备多肽类药品。这类药品药学研究一样遵照国家食品药品监督管理局已经公布相关技术指导标准通常性要求。不过，因为多肽关键由氨基酸（包含天然氨基酸和非天然氨基酸）组成，这使得多肽类药品在制备方法、结构确证、质量研究等方面又有和通常药品不一样独特问题。本指导标准就是在已经有相关指导标准基础上，对合成多肽药品药学研究方面所包含特殊问题进行分析，结合中国对多肽药品研究和评价实践经验，提出多肽药品药学各项研究通常性要求。当然，具体品种研究内容和深度还要取决于品种本身特征。 本指导标准适适用于采取液相或固相合成方法制备多肽药品。 二、合成多肽药品药学研究基础考虑 合成多肽药品药学研究关键内容、研究思绪、研究方法及通常性技术要求和其它类型化学药品基础一致。不过，因为多肽药品特点，在进行药学研究时还应注意考虑以下问题。 1、相关多肽（原料药）合成工艺选择考虑 多肽化学合成是有机合成一个很特殊分支，现在关键有液相合成和固相合成两种方法。 液相合成是经典多肽合成方法，通常采取逐步合成或片段缩合方法。逐步合成法通常从链C末端氨基酸开始，向不停增加氨基酸组分中反复添加单个α-氨基保护氨基酸。片段缩合通常先将目标序列合理分割为片段，再逐步合成各个片段，最终按序列要求将各个片段进行缩合。液相合成优点是每步中间产物全部能够纯化、能够取得中间产物理化常数、能够随意进行非氨基酸修饰、能够避免氨基酸缺失，缺点是较为费时、费力等。 固相合成是将目标肽第一个氨基酸羧基以共价键形式和固相载体(树脂)相连,再以这一氨基酸氨基为合成起点,使其和相邻氨基酸（氨基保护）羧基发生酰化反应,形成肽键。然后让包含有这两个氨基酸树脂肽氨基脱保护后和下一个氨基酸羧基反应,不停反复这一过程,直至目标肽形成为止。其优点是简化了每步反应后处理操作，避免因手工操作和物料转移而产生损失，产率较高且能够实现自动化等；其缺点是每步中间产物不能够纯化，必需采取较大氨基酸过量投料，粗品纯度不如液相合成物，必需经过可靠分离手段进行纯化等。 液相合成和固相合成各有优缺点，应依据合成实际需要选择适合工艺。通常而言，液相合成法较适于合成短肽；固相合成法更适于合成中、长肽。当然，也能够将两种方法结合应用，比如采取液相方法合成短肽片断，然后将该片断应用到固相合成中。 不管是液相合成还是固相合成,均是根据设计氨基酸次序,经过定向形成酰胺键方法得到目标分子。从理论上讲这并不复杂,但实施起来需要考虑原因还是比较多。简单羧酸和胺之间形成酰胺键,通常是先将羧基转变成一个活泼羧基衍生物(如酰氯或酸酐)再和胺作用,或在反应体系中加入缩合剂。不过，氨基酸之间形成酰胺键情况则复杂得多,这是因为每一个氨基酸既含有氨基,同时又含有羧基。假如将一个氨基酸羧基活化,则其能够和同一个或另一个氨基酸分子氨基反应;假如将多个氨基酸混合在一起,加入缩合剂,则只能得到由含有多个不一样氨基酸次序多肽组成混合物。所以，多肽合成研究中不仅需要关注活化方法、偶联方法等，更要关注保护/脱保护策略选择。 在多肽合成过程中，会产生部分和目标肽结构类似杂肽，比如因氨基酸消旋化产生非对映异构体、因部分氨基酸未连接上产生缺失肽、因肽键断裂产生断裂肽等。所以，需要考虑选择可靠分离和纯化方法使多肽纯度达成要求。多肽药品纯化通常采取色谱方法，但在部分情况下，有机合成中常见纯化方法（比如重结晶）也可能适用。 2、相关多肽结构确证研究考虑 鉴于多肽分子关键是由多种氨基酸组成，单纯利用有机化合物结构研究常见部分方法比如紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱等来解析多肽结构可能有一定困难；通常而言，氨基酸组成份析、质谱、氨基酸序列测定等对其结构确证相关键意义。 氨基酸组成份析可说明多肽组成是否正确；质谱能够提供分子量和序列信息。上述两项数据除用于证实多肽结构外，还能在一定程度上反应测试样品