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实验十 病毒的形态学诊断、培养方法和血清学试验 目 的 （一）观察病毒包涵体，并掌握其诊断意义。 （二）掌握病毒的形态并了解病毒包膜的获得。 （三）了解病毒培养的三种方法。 （四）掌握病毒学中主要血清学反应的原理 （五）熟悉病毒血凝抑制试验的测定过程 内 容 （一）病毒的形态学诊断 1. 病毒的电镜照片（示教） 2. 狂犬病毒包涵体（示教） 3. 麻疹病毒包涵体（示教） （二）病毒的培养法（录像） 1. 病毒的动物接种法 2. 病毒鸡胚培养法 3. 病毒的组织培养法 （三）血凝抑制试验（操作） 一、 病毒的形态学诊断 病毒形态学研究方法可分为两种：一种是应用电子显微镜技术，观察其大小 形态及排列特征，以帮助诊断；另一种是应用光学显微镜通过涂片染色或切片染色 观察包涵体。病毒感染细胞所产生的包涵体，其特征基本是固定的，故对病毒性疾 病的诊断具有一定价值。 【方法】 （一）病毒的电镜照片（示教） 观察腺病毒、疱疹病毒的电镜照片，注意其形态结构、大小、排列、及其包膜 的形成。 （二）狂犬病病毒内基（Negri）包涵体（示教） 用高倍镜或油镜观察经 HE （苏木紫-伊红染色）染色的死于狂犬病的犬脑组织 切片，注意包涵体在细胞内的形态、位置及染色性。 （三）麻疹病毒包涵体（示教） 用高倍镜或油镜观察经麻疹病毒培养后 HE 染色的人胚或羊膜细胞标本片，注 意包涵体在细胞内的位置、形态、染色性以及细胞融合情况。 二、 病毒动物接种法 实验动物在病毒学研究中有四方面用途：①分离鉴定病毒，如乙脑病毒；②连 续传代通过，以减弱有毒株对人的致病力，如狂犬病病毒；③制备抗血清；④病毒 致病机理的研究。 常用的实验动物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、绵羊、鸡、猴等。在病毒学研 究中，动物接种时为避免动物本身可能带有病毒，多采用实验室自己繁殖的动物。 首先根据研究目的选择动物种类，对病毒致病机制的研究，则选择愈接近人类的高 等动物（例如灵长类）研究结果愈有价值；其次要注意动物的年龄、性别和接种的 途径等各种因素，一般年幼的动物比成年动物对病毒的敏感性高。至于接种的途径 应根据病毒的嗜性决定，例如脑炎病毒以脑内注射最敏感。 （一）小白鼠尾静脉接种（录像） 【材料】 1. 动物：小白鼠 2. 病毒悬液 3. 碘酒、酒精、二甲苯、无菌 0.25ml 注射器、4 号针头及小铝匣 【方法】 1. 将小白鼠固定在小铝匣内，露出尾部，用碘酒消毒尾部，然后用酒精棉球连 续擦尾部皮肤（必要时用二甲苯擦）使血管扩张。 2. 尾背和左右两侧三根血管皆为静脉，可选一根扩张较好的静脉作接种用。左 手拇指捏住尾部的远端，向下弯 45°，右手持注射器，于弯处进针静脉，推液 0.1 毫升。 注意：推注时遇阻力且皮下隆起发白时，表示针头不在血管内应拔出重新进针； 如针头在血管内，推注时不感阻力，且可看到血管中血液由于注入液体而后退。 接种后逐日观察动物发病情况。 （二）小白鼠鼻内接种（录像） 【材料】 小白鼠、流感病毒鼠肺适应株病毒悬液、无菌小试管、无菌毛细管、麻醉用乙 醚、棉球及小玻瓶。 【方法】 1. 首先将沾有乙醚的棉球放入一清洁小玻瓶内。左手握小瓶，右手抓住小白鼠 将其头部塞入瓶口，进行全身麻醉。注意麻醉深度，不宜太浅或太深，太深时易遭 致麻醉死亡或非特异性吸入性肺炎，太浅则易在滴种时打喷嚏。 2. 用无菌毛细吸管吸取病毒悬液少许，连同毛细吸管插在无菌试管中备用。 3. 用左手将小白鼠握在手掌中，大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其头部朝前并 2 呈仰卧位置，另一手取事先吸有病毒悬液的吸管，慢慢滴出一点于滴管口而不使其 自然掉落，呈悬滴状。将悬滴靠近动物鼻尖，动物在呼吸时自然吸入，一般为 0.03～0.05 毫升，不宜过多。 4. 小白鼠慢慢苏醒，在饲养盒中逐日开始发病，发病的症状常为毛耸、咳嗽、 不食、甚至死亡。解剖尸体可观察到肺炎或血性病灶。