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华中农业大学2020 届博士研究生学位论文
目 录
摘 要8
Abstract 11
缩略语（Abbreviation ） 14
第1 章 文献综述 16
1.1 羧酸酯酶 16
1.2 哺乳动物羧酸酯酶 17
1.2.1 概述 17
1.2.2 水解转化机制 18
1.2.3 CES 药理学功能与应用20
1.2.4 CES 生理学功能与应用21
1.2.5 CES 与机体炎症水平的相关性23
1.2.6 转录表达调控24
1.2.7 人羧酸酯酶抑制剂25
1.3 猪肝羧酸酯酶28
1.3.1 基因序列及蛋白结构28
1.3.2 PLE 的功能性表达31
1.3.3 水解活性及功能应用32
第2 章 PLE 影响β- 内酰胺类抗生素疗效的研究35
2.1 β- 内酰胺类抗生素35
2.2 研究目的与意义36
2.3 试验材料36
2.3.1 细胞、质粒、标准菌株36
2.3.2 试验动物与组织样品37
2.3.3 主要化学试剂37
2.3.4 试剂配制38
2.3.5 主要仪器设备40
2.4 试验方法40
2.4.1 原核功能性表达PLE 40
2.4.2 PLE 水解p -NPA 活力测定41
2.4.3 PLE 水解AMO 、AMP 活力测定42
2.4.4 LC-MS/MS 43
2.4.5 牛津杯抑菌试验43
2.4.6 真核表达质粒构建44
2.4.7 瞬时转染46
2.4.8 猪肝原代细胞的分离培养47
5
猪肝羧酸酯酶调控β- 内酰胺类药物疗效及炎症反应的机制研究
2.4.9 鸟枪法蛋白组学分析48
2.4.10 Western blot 49
2.4.11 统计学分析50
2.5 结果与分析50
2.5.1 PLE 多克隆抗体对7 种PLEs 有交叉反应50
2.5.2 重组PLE 与组织S9 高活力水解p -NPA 51
2.5.3 原核表达PLE 和组织S9 高效水解AMO 和AMP 52
2.5.4 PLE 降低AMO 和AMP 的抑菌活性56
2.5.5 真核表达质粒鉴定结果58
2.5.6 完整细胞内PLE 高效水解AMO 和AMP 59
2.5.7 猪肝原代细胞高效水解AMO 和AMP60
2.5.8 血清中表达微量PLE 同工酶62
2.6 讨论64
2.7 小结67
第3 章 PLE 水解内源性大麻素促进炎症反应68
3.1 内源性大麻素68
3.1.1 概述68
3.1.2 内源性大麻素的合成68
3.1.3 内源性大麻素转运与代谢69
3.1.3 大麻素及产物调控机体炎症水平71
3.2 研究目的与意义72
3.3 试验材料73
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