茯苓细胞色素P450基因PcCYPs的克隆及功能分析.pdfVIP

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2021-01-10 发布于江苏
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茯苓细胞色素P450基因PcCYPs的克隆及功能分析.pdf

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茯苓细胞色素P450基因PcCYPs 的克隆及功能分析目录摘要i ABSTRACTⅲ 第一章绪论1 1.1研究问题的由来1 1.2 茯苓研究进展1 1.2.1茯苓简介 1 1.2.2 茯苓主要药用活性成分研究现状2 1.2.3茯苓酸生物合成途径研究进展2 1.3 真菌细胞色素P450研究概况3 1.3.1细胞色素P450介绍3 1.3.2 细胞色素P450 的命名4 1.3.3细胞色素P450 的结构和功能研究5 1.3.4 CYP450在真菌中的研究现状5 1.4 真菌基因功能研究方法6 1.5真菌CYP450异源表达研究进展7 1.6研究目的与意义7 第二章细胞色素P450 （PcCYPs）的克隆及序列分析 9 2.1 实验材料9 2.1.1菌株和质粒9 2.1.2 酶和生化试剂9 2.1.3培养基和培养条件 10 2.1.4 主要仪器设备 10 2.2 方法10 2.2.1RNA 提取10 2.2.2 第一链cDNA 的合成11 2.2.3PcCYPs 的扩增 11 2.2.4PCR 产物回收13 2.2.5 目的基因PcCYPs 与克隆载体的连接、转化、验证13 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位论文 2.2.6PcCYPs 的序列比对及系统进化树构建15 2.2.7PcCYPs 的基础生物信息学分析15 2.2.8PcCYP1不同剪切体的表达量分析16 2.3 结果与分析16 2.3.1茯苓PcCYPs 的克隆16 2.3.2PcCYP1、PcCYP3序列分析17 2.3.3PcCYPs 系统发育分析18 2.3.4PcCYPs基本特性分析20 2.3.5PcCYP1 PcCYP2 23 和的表达分析 2.4 结论与讨论24 第三章 PcCYPs 基因超表达载体构建及其表达分析26 3.1实验材料26 3.1.1供试菌株26 3.1.2 主要试剂26 3.1.3主要溶液配制27 3.1.4 培养基27 3.2 实验方法28 3.2.1 目的基因PcCYPs 的获取28 3.2.2 目的片段的切胶回收28 3.2.3 目的基因与pTOPO-Blunt 平末端载体的连接、转化、验证29 3.2.4 质粒的提取29 3.2.5超表达载体pBlueScript SK 和重组T 载的双酶切、