利用二化螟内源microRNAcsu-miR260培育抗二化螟水稻.pdfVIP

利用二化螟内源microRNA csu-miR260 培育抗二化螟水稻 目录 摘要 i Abstract iii 缩略词表 vi 1 前言 1 1.1 水稻抗虫技术发展 1 1.2 水稻二化螟研究 3 1.2.1 二化螟的生物学特征 3 1.2.2 二化螟的灾害现状 4 1.3 RNA 干扰 6 1.3.1 dsRNA 介导的RNA 干扰 7 1.3.2 miRNAs 介导的RNA 干扰 8 1.3.3 piRNAs 介导的RNA 干扰 9 1.4 RNA 干扰技术在植物抗虫育种中的应用 9 1.5 研究目的与意义 13 2 材料与方法 13 2.1 实验材料 13 2.2 dsRNA 干涉载体的构建 14 2.3 水稻的遗传转化 16 2.4 转基因植株的阳性检测 18 2.5 转基因植株amiRNA 表达量的检测 19 2.6 转基因植株dsRNA 表达量的检测 21 2.7 csu260 代表转基因家系的小RNA 测序 23 2.8 室内抗虫性鉴定试验 24 2.8.1 短期转基因水稻茎秆接虫试验 24 2.8.2 转基因水稻茎秆连续喂饲试验 24 2.8.3 amiRNA agomir 离体饲喂试验 25 2.9 田间抗虫性鉴定试验 26 2.9.1 amiRNA 转基因水稻分蘖期田间抗虫性鉴定 26 2.9.2 amiRNA 转基因水稻抽穗期田间抗虫性鉴定 27 2. 10 二化螟取食amiRNA 水稻后靶基因表达量的检测 27 3 结果与分析 30 3.1 csu260 代表转基因家系的小RNA 测序 30 I 华中农业大学2020 届硕士研究生毕业论文 3.2 miRNA agomir 饲喂二化螟实验 31 3.3 csu260 转基因植株连续饲喂抗虫性鉴定 32 3.4 csu260 转基因水稻田间抗虫性鉴定 34 3.4.1 csu260 转基因水稻分蘖期田间抗虫性鉴定 34 3.4.2 csu260 转基因水稻抽穗期田间抗虫性鉴定 35 3.5 dsRNA 转基因植株获得及PCR 阳性检测 36 3.6 RNAi 转基因水稻茎秆饲喂二化螟进行抗性鉴定 36 4 讨论 38 4.1 agomir 的饲喂及靶基因检测实验 38 4.2 csu260 转基因材料的抗虫性鉴定分析 39 4.3 dsRNA 和miRNA 干涉效果对比 40 4.4 后续实验计划 4 1 参考文献 42 致谢 54 II 利用二化螟内源microRNA csu-miR260 培育抗二化螟水稻 摘要 水稻是最为重要的粮食作物之一，而二化螟是最为常见的一种水稻害虫，每年 都会造成巨大的经济损失。目前水稻生产上二化螟的防治主要依赖化学杀虫剂，然 而由此产生的环境污染、生态破坏、食品安全以及害虫耐药性等问题较为突出。因 此，培育抗二化螟水稻品种来代替化学杀虫剂防治方法尤为重要。随着RNA 干扰 （RNAi ）技术的不断地发展与成熟，其中人工 microRNA （artificial microRNA, amiRNA ）技术的高效率、精准作用靶点等优点，被认为