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TGEVN 蛋白对猪FcRn 的表达调控及其对IgG 胞转作用的影响 目录 摘 要i ABSTRACTiii Abbreviation v 缩略语表 （ ） 1文献综述1 1.2 猪传染性胃肠炎病毒1 1.1.1TGEV 基因组结构1 1.1.2TGEV 主要编码蛋白及其功能1 1.1.3TGEV 的感染与免疫机制3 1.2 新生儿Fc 受体 （FcRn）4 1.2.1FcRn 的分布4 1.2.2FcRn 的结构4 1.2.3FcRn IgG 5 与 的跨细胞转运 1.2.4FcRn 的临床应用5 1.2.5FcRn 在组织器官中的研究6 3材料方法9 3.1材料9 3.1.1菌株、细胞与实验动物9 3.1.2 质粒与杆粒9 3.1.3主要药品与试剂9 3.1.4 主要仪器9 3.1.5主要抗生素与培养基的配制10 3.2 实验方法14 3.2.1 引物设计14 3.2.2TGEV 病毒RNA 的提取15 3.2.3TGEVN 蛋白基因的RT-PCR 扩增15 3.2.4 原核表达载体的构建16 3.2.5GST-N 蛋白和His-N 蛋白的表达与纯化17 3.2.6 抗TGEVN 蛋白多克隆抗体的制备18 3.2.7pFastBacHTb 真核表达载体的构建19 3.2.7pFastBacHTb-N 重组质粒的转座20 3.2.8重组穿梭质粒Bacmid 的筛选与鉴定20 3.2.9 重组阳性杆粒Bacmid转染Sf9细胞23 TGEVN 蛋白对猪FcRn 的表达调控及其对IgG 胞转作用的影响 3.2.10杆状病毒的扩增24 3.2.11TGEVN 蛋白在Sf9细胞中的表达与纯化25 3.2.12TGEVN 蛋白的SDS和Westernblot 检测26 3.2.13 间接免疫荧光实验27 3.2.14 SYBR GreenI 实时荧光定量PCR28 3.2.15 双荧光素酶检测实验28 3.2.16 IgG biotin-IgG 29 生物素标记的 （ ）体外胞转实验 4 结果30 4.1TGEVN 蛋白基因的克隆与原核表达载体的构建30 4.2GST-N 蛋白和His-N 蛋白的表达纯化31 4.3兔抗TGEVN 蛋白多克隆抗体的制备32 4.4TGEVN 重组穿梭质粒的鉴定32 4.5重组阳性穿梭杆粒Bacmid转染Sf9细胞34 4.6Sf9 N SDSWesternblot 34 真核表达 蛋白的 电泳与 鉴定 4.7TGEVN 蛋白的间接免疫荧光检测35 4.8TGEVN 重组蛋白刺激IPEC-J2 细胞后FcRn 上调表达36 4.9TGEVN 重组蛋白上调FcRn 介导的IgG转运37 4.10N 蛋白激活NF-κB信号通路上调FcRn38 4.11TGEVN 蛋白功能域的确定40 5讨论42 5.1利用昆虫杆状病毒表达系统对TGEVN 蛋白进行外源表达42 5.2TGEVN 蛋白调控FcRn 的机制42 5.3外源表达TGEVN 蛋白对FcRn 的调控以及胞转实验43 5.4 结论44 参考文献45 TGEVN 蛋白对猪FcRn 的表达调控及其对IgG 胞转作用的影响 摘 要 猪传染性胃肠炎(TGE)是由TGEV 感染引起的一种高度接触性传染病。TGEV 感染引起肠屏障功能障碍并破坏肠道稳态。TGEV感染后48小时内猪小肠绒毛萎缩， 继而出现隐窝增生，最终导致仔猪严重脱水直至死亡，是威