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对羟基苯甲酸异丁酯对猪卵母细胞体外成熟的影响及其机制研究 目录 摘要 i Abstract iii 缩略词（Abbreviation ） vi 1.前言 1 1.1 研究问题的由来 1 1.2 环境中的对羟基苯甲酸酯及其人类接触现状 2 1.3 对羟基苯甲酸异丁酯的性质与生物安全性 4 1.4 卵丘、细胞骨架、氧化应激和组蛋白修饰对卵母细胞成熟的影响 5 1.4.1 卵丘颗粒细胞对卵母细胞成熟的影响 6 1.4.2 细胞骨架与卵母细胞成熟 7 1.4.3 氧化应激与卵母细胞成熟 8 1.4.4 组蛋白修饰与卵母细胞成熟 9 1.5 研究目的与意义 10 2 实验材料与方法 10 2.1 实验动物材料 10 2.2 实验试剂与耗材 10 2.2.1 主要的实验耗材 10 2.2.2 实验试剂和药品 11 2.3 实验所需仪器 11 2.4 常用试剂配制 12 2.5 研究方法 15 2.5.1 猪卵母细胞体外培养 15 2.5.2 免疫荧光染色 17 2.5.3 猪卵母细胞 ROS 水平检测 18 2.5.4 猪卵母细胞早期凋亡（Annexin V-FITC ）检测 18 2.5.5 统计分析 19 3.结果与分析 19 3.1 不同浓度 IBP 对卵丘细胞扩展和第一极体排放的影响 19 I 华中农业大学 2020 届硕士研究生学位（毕业）论文 3.2 IBP 影响猪卵母细胞纺锤体组装和染色体排列 22 3.3 IBP 引起猪卵母细胞微丝分布异常 23 3.4 IBP 诱导猪卵母细胞氧化应激 24 3.5 IBP 引起猪卵母细胞早期凋亡 25 3.6 IBP 改变猪卵母细胞组蛋白 H3K9 和 H3K27 的甲基化水平 26 4.讨论 29 全文总结 31 创新与不足 32 参考文献 33 附录 43 致谢 44 II 对羟基苯甲酸异丁酯对猪卵母细胞体外成熟的影响及其机制研究 摘要 随着人类工业水平的不断提高，为了满足不同生产生活需求，越来越多化学 品被合成并运用到各个领域。然而，这些化学品在满足人们需求的同时，也在不 知不觉中给人类以及动物健康带来了风险。对羟基苯甲酸异丁酯（Isobutylparaben, IBP ）是一种人工合成的化学品，由于价格低廉且具有很好的抗菌能力，被广泛 应用于护理产品、医药、饲料、造纸、印刷等领域。近年来的研究表明，IBP 是 一种具有雌激素活性的内分泌干扰物，会对生物体的生殖健康构成潜在威胁。然 而，雌性动物卵母细胞是否也会受这种化合物的影响以及会产生何种影响还未见 报道。本课题利用猪卵丘卵母细胞复合体的体外成熟培养体系，研究了不同浓度 IBP （0 mmol/L、0.1 mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L、0.4 mmol/L、0.6 mmol/L ） 对猪卵母细胞成熟的急性毒性影响，并进一步探讨了其可能的影响机制，包括卵 丘扩展、细胞骨架分布、氧化应激、早期细胞凋亡和组蛋白甲基化修饰。研究结 果如下： （1）. IBP 抑制猪卵母细胞卵丘扩展和第一极体排放：在猪卵丘卵母细胞复合体 体外成熟培养的过程中，添加不同浓度的 IBP ，经过 44h 成熟培养发现，随着 IBP 浓度的升高，猪卵母细胞第一极体排放（PBE ）比率呈现线性下降趋势（r = 0.8410 ）。虽然0.1 mmol/L 的IBP 对猪卵母细胞第一极体排放比率没有显著影响 （P 0.05 ）。但是0.2 mmol/