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微囊藻毒素microcystin-LR 对雌性斑马鱼的生殖毒性及其作用机制探究 目录 摘要i Abstract iii 第一章 文献综述 1 1.1 微囊藻毒素概述 1 1.1.1 微囊藻毒素的产生及传递 1 1.1.2 微囊藻毒素的毒性3 1.1.2.1 微囊藻毒素的结构和理化性质3 1.1.2.2 微囊藻毒素对人类的毒性作用3 1.1.2.3 微囊藻毒素对陆生动物的毒性作用4 1.1.2.4 微囊藻毒素对水生动物的毒性作用6 1.1.2.5 微囊藻毒素对鱼类的生殖毒性7 1.2 微囊藻毒素的致毒机制8 1.2.1 PP1 和PP2A 活性抑制8 1.2.2 氧化应激9 1.2.3 DNA 损伤和诱导细胞凋亡 10 1.2.4 其它机制 11 1.3 本研究的目的和意义 12 第二章 微囊藻毒素microcystin-LR 通过ERK1/2-MPF 信号通路影响斑马鱼卵母 细胞成熟 14 2.1 前言 14 2.2 材料与方法 15 2.2.1 毒素的配制 15 2.2.2 主要试剂 15 2.2.3 斑马鱼的养殖和MC-LR 暴露 16 2.2.4 样品采集 17 2.2.5 GVBD 率测定 17 2.2.6 组织学切片制作 17 I 微囊藻毒素microcystin-LR 对雌性斑马鱼的生殖毒性及其作用机制探究 2.2.7 卵巢中cAMP、VTG 含量的测定 18 2.2.8 Western blot 分析 18 2.2.9 统计学分析 19 2.3 结果与分析 19 2.3.1 MC-LR 对斑马鱼生殖机能的影响 19 2.3.2 MC-LR 对斑马鱼卵母细胞GVBD 率的影响20 2.3.3 卵巢组织病理学观察21 2.3.4 MC-LR 暴露对斑马鱼卵巢cAMP 和VTG 水平的影响22 2.3.5 MC-LR 暴露对斑马鱼卵母细胞成熟相关蛋白表达的影响22 2.4 讨论24 第三章 微囊藻毒素microcystin-LR 通过内质网应激诱导斑马鱼卵母细胞凋亡26 3.1 前言26 3.2 材料与方法27 3.2.1 毒素的配制27 3.2.2 主要试剂27 3.2.3 斑马鱼的养殖和MC-LR 攻毒28 3.2.4 亲鱼繁殖及样品采集28 3.2.5 TUNEL 切片制作28 3.2.6 ROS 和吖啶橙（AO ）染色测定28 3.2.7 基因表达29 3.2.8 蛋白表达分析30 3.2.9 数据分析30 3.3 结果与分析30 3.3.1MC-LR 对斑马鱼性腺体指数的影响30 3.3.2 雌性亲本暴露MC-LR 对子代ROS 的影响31 3.3.3 雌性亲本暴露MC-LR 对卵巢及子代凋亡率的影响32 3.3.4 雌性亲本暴露 MC-LR