hemasson实验步骤及分析方法.docx

HE染色 烤片机60-70C，烤片20min 脱蜡至水。二甲苯I、II、III每缸10min，梯度酒精（无水、无水、90%、80%） 每缸5min，tap water or dH 2O流水冲洗，擦净玻片。 苏木素滴染5-10min，tap water or dH 2O流水冲洗。 浸入95%酒精30-60S后取出勿擦，滴染伊红3-5min。 脱水。75%酒精-90%酒精-95%酒精-无水酒精-无水酒精依次涮一涮，最后一个 无水酒精3min。二甲苯I、II每缸5min 封片。待残余二甲苯挥发，中性树胶圭寸片。 分析方法： 拍照。40X物镜下选取含有圆形或近似圆形细胞的视野拍照，拍照张数依组织 大小和HE染色结果而定，但应确保含有足够的细胞数。 定标。在同一显微镜下拍测微尺，算得 40X物镜下90 pixels=10um 。 打开 Image J — Open — Analyse — Set Scale — Set Measurement — Freehand selections —圈目标细胞一 Analyse — Measure — Analyse — Label —保存带标记 的图片。 测量。选择含有细胞核的、圆形或近似圆形的细胞，用Image J测量细胞大小。 每块组织至少选取60个细胞。最后求Area的平均值。 Set Scale S3 Click to Remove Scale I |7 Global Scale: g pixels/um OK Cancel Help [mageJ r SM Mea*suremenit￡i $ Area IF jMeah gray value: 厂 Slaridard deviation 厂 Mod^l gray value 厂 Min max ray value 厂 Centroid 厂 Centrof mass 厂 Psrimeltr IP Boundirig redangle I- Fil ellipse 1 厂 Snape dscnplors 厂 Frets diameter 厂 Inleg rsited dens rly 厂 Median 厂 skevvnss 厂 Ku nos is 17 Area Faction 厂 Stack pocltiofl l* umtt lo threshold 厂 Display label r liwertY cortjinales 厂 Scientific nolalion 厂 Add ta overlap Redirect to: |lNone Decimal places（0-9） 厂 OK | Can sen | Help \ File Edit Image Process Analyze Plugins Window Help □也羽⑥口期蚪/创n_i丄 Freehand select ions Masson染色 烤片机60-70C，烤片20min 脱蜡至水。二甲苯I、II、III每缸10min，梯度酒精（无水、无水、90%、80%） 每缸 5min，tap water or dH 2O 流水冲洗。 Bouin液固定。用事先60C预热15min的Bouin液固定1h , dHzO冲洗5min。 含铁苏木素A、B各20ml （等体积混合），5min, dH2。冲洗5min，再用去离 子水冲洗数次。 5?滴染碱性品红5min,去离子水冲洗数次。 6.Mix磷钨酸10ml、磷钼酸10ml、去离子水20ml, 5min。切勿冲洗。 7?滴染苯胺蓝5min,去离子水冲洗数次。 8?脱水。75%酒精-90%酒精-95%酒精-无水酒精-无水酒精依次涮一涮，最后一个 无水酒精3min。二甲苯I、II每缸5min。 9. 封片。待残余二甲苯挥发，中性树胶圭寸片。 分析方法： 1?拍照。20 X物镜下地毯式拍照，使照片全部覆盖组织块。 测量 Area%。打开 Image J — Open — Analyse — Set Measurements — Image — Type — RGB Stack — Image — Adjust — Threshold —参考原始图片调节第二条使 蓝染部分充分显现Analyse — Measure。 所有照片测量完毕后，求Area%的平均值。拍照和分析同一人完成，确保所有 照片背景色相同，减小测量误差。 R Ara [iM @ 3D ^rdiy V3.lu s ■ 厂 Standard deviaticin 厂 Mndal gray value r Mln ms par value 厂 Cmtroid 厂 Center of mass 厂 Primeter 厂 Bounding rectangle 厂 Fit e