浙科版生物选修三知识要点整理.doc

选修三 P2 基因工程 核心：构建重组DNA分子 定向改造生物的技术 实质：基因重组 是狭义的遗传工程（广义的遗传工程泛指把一种生物的遗传物质（细胞核、染色体脱氧核糖核酸等）移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。） 理论基础：DNA是生物遗传物质的发现、DNA双螺旋结构的确立、遗传信息传递方式的认定 技术保障：限制性核酸内切酶、DNA连接酶（前两者为基因的分离和重组提供了必要的手段）和质粒载体的发现与应用 限制性核酸内切酶：识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶 细菌中分离出 对DNA分子上不同的特定的核苷酸序列进行识别和切割 切割的是磷酸二酯键 粘性末端、平末端 将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个粘性末端 识别序列 eg GAATTC DNA连接酶：作用：将具有末端碱基互补的2个DNA片段连接在一起，形成的DNA分子成为重组DNA分子 DNA聚合酶需要模板，DNA连接酶不需要 连接的是磷酸二酯键 质粒：能够自主复制的小型双链环状DNA分子，在细菌中以独立于染色体之外的方式存在，是一种特殊的遗传物质 质粒作为载体的条件：1、能自我复制 2、具有切割位点 3、有标记基因，以供重组DNA的鉴定和选择 质粒可以从真核生物（酵母菌），微生物中获取 质粒可在自身细胞、受体细胞、体外（PCR技术）复制 载体：质粒、λ噬菌体（前两者能把外源基因载入到大肠杆菌等宿主细胞中）、植物病毒、动物病毒（后两者把外源基因分别载入到植物细胞和动物细胞内） P5 基因工程的原理和技术 基本原理：让人们感兴趣的基因（即目的基因）在宿主细胞中稳定和高效地表达 步骤：一、获得目的基因 方法一：目的基因的序列已知：化学合成（胰岛素基因）or 聚合酶链式反应（PCR）扩增｛在短时间内形成大量DNA片段，DNA复制形成的是整个DNA分子｝ or 反转录法（已知RNA→cDNA） PCR:体外的小试管中通过酶促反应有选择的大量扩增特定DNA片段的技术 高温DNA解旋 方法二：序列未知，从基因文库中获取 二、形成重组DNA分子（基因工程的核心） 通常用相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA，然后用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接在一起，形成重组DNA分子 三、将重组DNA分子导入受体细胞 常用的受体细胞：大肠杆菌[人胰岛素、人生长激素、白细胞介素-2]、枯草杆菌、酵母菌（真核）[α-干扰素、乙型肝炎疫苗等蛋白质产品]和动植物细胞[生物新品种] Eg 用质粒作为载体，宿主细胞应该选择大肠杆菌。用氯化钙处理大肠杆菌，增加大肠杆菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入大肠杆菌宿主细胞（胞吞进入） 四、筛选含有目的基因的受体细胞 经过培养，目的基因能和质粒一起在宿主细胞内大量扩增 五、目的基因的表达 Eg 转入了人胰岛素原基因的大肠杆菌，可以合成人胰岛素原。进一步加工（内质网、高尔基体）后可获得具有生物活性的胰岛素 检测和筛选目的基因的其他方法：①采用DNA分子杂交技术（目的基因为探针） ②核酸分子杂交法（标记的目的基因作探针与mRNA杂交） ③抗原抗体杂交法←检测是否表达 P9 基因工程的应用 转基因植物：时间短、克服远缘亲本难以杂交 转基因动物：省时省力 基因工程药物：胰岛素（大肠杆菌） 干扰素：是病毒侵入细胞后成熟的糖蛋白 抗病毒、抗细胞分裂和免疫调节等多种生物学功能，是治疗病毒性肝炎和肿瘤的药物（并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。） 乙型肝炎疫苗：乙肝抗原在酵母菌中表达成功 基因治疗：向目标细胞中引入正常功能的基因，以纠正或补偿基因的缺陷，达到