实验二-植物核酸的提取-教案.pdfVIP

授课教师 学生人数 55 课 题 实验二 植物基因组 DNA 的提取 授课类型 新授课 授课方法 讲授、演示 教学用具 多媒体 教学目的 掌握 CTAB 法提取植物基因组 DNA 的原理与方法 教学重点 理解每一步实验操作的目的 教学难点 实验操作过程中的一些注意事项 教学过程 一、 背景知识 1.DNA在细胞中存在的位置？植物细胞 DNA 存在的位置和动物细胞有何不同？（图） 2.DNA 的存在形式 双螺旋结构图 双螺旋结构组成 染色体是怎样形成的？ 一级结构（核小体=双螺旋+组蛋白）-二级结构（螺线管）-三级结构（超螺线管）-四级结构（染色体） 真核生物基因组 DNA 是经过四级包装形成了染色体，先是 DNA 形成双螺旋结构，再与组蛋白形成核 小体（一级结构），压缩 7 倍，再形成螺旋管（二级结构），压缩 6 倍，之后再形成超螺旋管（三级结构）， 压缩 40 倍，最后超螺旋管压缩形成染色体（四级结构），再压缩 5 倍，正常细胞中基因组 DNA 是以染色质（相 当于一级结构）形式存在，在细胞分裂的中期以染色体形式存在，真核生物细胞质 DNA 主要是以裸露的环 状 DNA 形式存在，没有核小体结构。 3.遗传物质核酸除了 DNA 外还有另外一种，即 RNA ，它与DNA 在结构上的区别？（图） RNA 基本单位中间的五碳糖是核糖，含氮碱基尿嘧啶（U）替代 胸腺嘧啶（T） 4.核酸的理化性质 （1）形状：DNA 为白色类似石棉样的纤维状物， RNA 的纯品呈白色粉末或结晶。 （2）溶解性：一般都溶于水，不溶于乙醇、异丙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。 （3）保存：在酸性溶液中，核酸易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。 二、实验目的 1.掌握 CTAB 法提取植物基因组 DNA 的原理 2.CTAB 法提取植物基因组 DNA 的实验方法 三、实验原理 1.核酸在细胞中的存在方式， 是以核酸-蛋白质复合物的形式存在，如一级结构核小体（图）：DNA 螺旋+组蛋白 2.通过低温研钵破坏植物细胞壁 3.加入 CTAB 溶解细胞膜，CTAB 与核酸形成核酸-CTAB 复合物，使核酸与蛋白质分离。 4.加入高盐溶液溶解核酸-CTAB 复合物，加入蛋白质变性剂使蛋白质变性沉淀出来，离心除去蛋白质。 5.加入核酸沉淀剂，溶解 CTAB ，并使和核酸沉淀出来，离心得到核酸沉淀。 四、实验仪器 1.水浴锅 2.离心机（12 管）：3 台 3.研钵： 10 个 4.移液枪（包括枪头）：1ml、400ul 五、实验材料与药品 实验材料：新鲜菠菜叶片 1.十六烷基三甲基溴化铵（CTAB） 作用：溶解细胞膜并与核酸结合，便于分离核酸。 商品信息：瓶装/100g。 理化性质：白色或浅黄色结晶体至粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水,震荡时产生大量泡 沫，化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。有吸湿性，在酸性溶液中稳定；溶于 10 份水，溶于 热水、乙醇、三氯甲烷,易溶于异丙醇水溶液,微溶于丙酮,不溶于乙醚和苯。 储存：在阴凉，干燥，通风良好的地方，远离不相容的物质。 危害：高毒，对皮肤及粘膜刺激性小，有轻微脱脂作用。 2.1M Tris-HCl PH8.0 缓冲液 作用：提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏 商品信息：瓶/100ml，无色、澄清溶液 理化性质：Tris 中文品名为三羟甲基氨基甲烷，瓶/500g。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水，微 溶于乙酸乙酯、苯，不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺激性的化学物质。 储存：室温保存。 危害：毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。 3.乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na） 作用：螯合 Mg2+或 Mn2+离子,抑制脱氧核糖核酸酶（DNase）活性，活性依赖于钙离子，并能被镁离子 或二价锰离子激活。 商品信息：瓶/250g。 理化性质：无味无臭或微咸的白色或乳白色结晶或颗粒状。溶于，不溶于、，其水溶液 pH 值约为 5.3。 可由 EDTA 与氢氧化钠和碳酸钙作用制得。 储存：于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。应与氧化剂分开存放，切忌混储。配备相应品种和数 量的消防器材。储区应备有合适的材料收容泄漏物。 危害：对粘