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丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义
吴晓东 ,中国科学院研究生院 北京市 100039 首都医学发展科研基金资助项目 , No.
2002-3068 首都医科大学基础临床合作基金资助项目 , No. 02JL20 通讯作者 :谢立 , 100054,
北京市 , 首都医科大学附属北京佑安医院 , 中国科学院研究生院 . xl811cn@163.com 电话 :
0102276 收稿日期 : 2005-01-29 接受日期 : 2005-03-03 摘要
丙型肝炎病毒 (HCV) 为嗜肝性慢性病毒 .HCV 感染后,患者的起病和临床症状极不典型,
以亚临床感染为多见,容易造成漏诊 .HCV 感染的慢性化发生率明显高于乙型肝炎,较乙型
肝炎易早期出现肝硬化、 肝癌,死亡率较高 .因此 HCV 的检测对丙型肝炎病毒感染的早期诊
断和指导临床治疗有重大的意义
.目前用于
HCV 感染诊断的两项主要指标为抗
-HCV 和 HCV
RNA ,现多采用的第三代检测抗
-HCV EIA
试剂增加了 HCV 基因组 NS5 区表达的蛋白作为
抗原,进一步提高了试剂的敏感性, 但还存在 “窗口期 ”漏检的问题 .HCV RNA
检测灵敏度高、
特异性强,具有早期诊断的意义,但检出率较低,检测复杂,也可出现假阳性
.作为抗 -HCV
检验的补充试验, HCV 核心抗原的检测对处于
HCV 感染 “窗口期 ”的个体检测有很大价值 .
谢立 , 吴晓东 . 丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义
. 世界华人消化杂志
2005;13(7):884-886 0 引言
丙型肝炎病毒是单股正链
RNA 病毒 .1991 年,国际病毒命名
委员会 (ICTV) 将其归为黄病毒科丙型肝炎病毒属
[1] ,其基因组含有一个大约
9033 个核苷酸
构成的大开放读码框 (ORF),可编码 3010-3033
个氨基酸的多蛋白前体,多蛋白
N 端的 1/4
依次为核心蛋白 (C) 和包膜蛋白
(E1 和 E2) 等结构蛋白,其余依次为
NS2、NS3 、NS4 和 NS5
等非结构蛋白 [2] ,膜蛋白分布于病毒表面, NS3 蛋白具有蛋白酶的功能, NS5 蛋白为一依赖
于 RNA 的 RNA 多聚酶 . 与其他 RNA 病毒一样, HCV 基因组有很大的变异性,可能会引
起其分子生物学行为、感染性、临床致病性及对药物治疗的反应等诸方面的不同 [3-4] .现已证
实, 90%非肠道传播的非甲非乙型肝炎
(NANBH)
为
HCV
感染所致
[1] ,35-50% 的非甲非乙型
肝炎发展为慢性肝炎,与肝癌的发生相关
[2] .
自从
1978 年
Shirachi et al
首先报道用双向免
疫扩散法在输血后肝炎患者急性期和恢复期血清中找到了丙型肝炎病毒特异性的抗原和抗
体,而后不少学者利用放射免疫 (RIA) 和酶联免疫 (ELISA) 等方法都曾找到了特异性的丙型肝
炎病毒抗原和抗体 [5-6].1989 年, Choo et al 从大量有高度传染性的黑猩猩血浆中提取核酸,
经逆转录和分子克隆并进行筛选,获得了部分 HCVcDNA 序列,并表达重组抗原,建立了
特异性抗 -HCV 血清学的检测方法 [7-8] ,使丙型肝炎的研究成为近年来非常活跃的研究领域,
并取得了重大进展 .我们就 HCV 血清学检测方法的研究进展进行了综述 .
1 丙型肝炎病毒抗 -HCV 的检测
随着血液制品在世界范围的流通, HCV 感染呈世界性分布,为了控制丙型肝炎病毒的血
液传播,世界各国均开展了对献血员抗 -HCV 的检测 .常用的抗 -HCV 诊断试剂采用间接酶联
免疫法 (ELISA) ,其基本原理是以 HCV 抗原包被酶标板, 用辣根过氧化物酶标记的抗人 IgG
与被检血清中的抗 -HCV 反应,邻苯二胺 (OPD) 或 3, 3’5,5’-四甲基联苯胺 (TMB) 显色后,
根据颜色的深浅进行阴阳性判断 .该方法中包被抗原的组成和质量是关键因素 .第一代抗
-HCV ELISA 采用的抗原 C100-3 是 HCV 非结构基因 (NS3/NS4) 和人超氧化物歧化酶基因嵌合
后表达的融合蛋白,灵敏度低,漏检率较高 ;第二代抗 -HCV ELISA 在第一代基础上增加了
核心区重组蛋白 C22 和 NS3 区重组蛋白 C33c,虽然在灵敏度和特异性上有很大改善, 但仍不
能排除由于重组融合蛋白带来的少数假阳性和极少数的漏检 [9] .目前我国多采用第三代抗
-HCV ELISA 试剂,其包被抗原为 HCV 核心抗原、 NS3、NS4 和 NS5 抗原,特
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