CPPU对猕猴桃果实库强调控作用及其与糖代谢的关系分析.pdfVIP

摘要 摘要 果实大小是影响猕猴桃果实品质和价格的主要因素，生产上广泛利用氯吡苯脲 （CPPU ）调控猕猴桃等果实大小。CPPU 处理可促进果实细胞分裂和扩增，加快果实 膨大，这也与提高的果实库强有关。为探明猕猴桃果实库强调控与果实同化物卸载和 代谢的关系，本论文以美味系猕猴桃‘海沃德’ （Actinidia deliciosa ‘Hayward’）为试材， 以清水作为对照，于盛花后 20 d 采用50 mg/L 的CPPU 溶液浸蘸猕猴桃幼果，研究 了 CPPU 处理后对猕猴桃库强的调控作用以及糖代谢的影响，并通过转录组分析了 CPPU 处理后对相关代谢基因表达的影响。同时构建了蔗糖卸载后调控的关键基因 MdNINV1 和AdSUSY1 的过表达和干扰载体，并利用农杆菌侵染法获得了相应猕猴 桃转基因株系，进行了糖含量等指标测定，获得的主要研究结果如下： 1.与对照相比，花后20 d 利用50 mg/L 的CPPU 处理能有效增加海沃德猕猴桃果 实单果质量，增加果实纵横径，且CPPU 处理后果实大小增加幅度最大的是在处理后 第一和第二周，即花后35 天之前。对果实糖酸含量测定发现，CPPU 处理后，果糖含 量在处理后前3 周无明显变化，在发育后期均高于同期对照组。而葡萄糖，蔗糖等含 量在整个果实发育期均高于同期对照组。对糖代谢相关酶活性分析发现：CPPU 处理 的果实与对照果实相比，SPS （蔗糖磷酸合酶）活性整体升高，参与蔗糖裂解的蔗糖 合酶（SUSY）和酸性转化酶（AINV ）在果实发育前期高于对照，在发育后期低于对 照。这些结果表明，CPPU 处理后提高了果实的库强，增加了 CHO 分配，这可能与 加快的蔗糖裂解相关。此外，CPPU 处理的猕猴桃Vc 含量在生长发育前期高于对照 组，而发育后期低于对照组。对照果实和CPPU 处理的果实还原型Vc 和总Vc 含量 在整个果实生长发育期均呈现先上升后下降的变化规律。 2.为进一步探明CPPU 处理提高果实库强，促进果实生长的机制，利用RNA-seq 技术分析了CPPU 处理后前三周果实转录组的变化。结果表明，通过CPPU 处理以后 对糖代谢通路产生了影响，在碳水化合物代谢转运通路，CPPU 处理上调了β-淀粉酶、 α-葡聚糖磷酸化酶等淀粉代谢基因，在蔗糖卸载途径，CPPU 处理上调了SUT，SPT， CWINV，SUSY，HXK 等基因的表达水平，尤其与猕猴桃库强相关的SUSY1 在CPPU 处理后第7 天有显著的上调，这可能与CPPU 调控SUSY 活性和库强有直接关系。同 时对激素信号进行分析，发现差异基因主要集中在细胞分裂素的感知和信号转导，乙 烯生物合成，乙烯感知和信号转导，赤霉素生物合成，赤霉素修饰和降解等途径，这 些激素信号的变化可能与库强调控、蔗糖卸载能力及细胞分裂膨大等相关基因变化有 关。 3.为探明蔗糖裂解方式在猕猴桃蔗糖卸载中的作用，构建了苹果蔗糖主要裂解酶 I 西北农林科技大学硕士学位论文 中性转移酶基因 MdNINV1 过表达载体和猕猴桃蔗糖裂解关键酶蔗糖合酶基因 AdSUSY1 干扰载体，通过农杆菌侵染获得了‘海沃德’猕猴桃抗性株系，通过DNA 和 RNA 水平分子检测，共获得了MdNINV1 异源过量表达的3 个阳性株系；同时获得了 AdSUSY1 干扰的3 个株系。对MdNINV1 叶片糖含量测定发现，MdNINV1 转基因猕 猴桃叶片果糖，葡萄糖含量均低于野生型，其中果糖含量降低约50%，葡萄糖含量降 低约30%，而蔗糖含量变化并不显著。对AdSUSY1 叶片糖含量测定发现，转基因株 系蔗糖含量明显降低。 关键词：猕猴桃；CPPU ；果实大小；糖代谢；SUSY；NINV II 目录 目录 第一章 文献综述 1 1